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土壤氨基糖实验流程如下:一、实验方法及原理氨基糖在吡啶-甲醇溶液中,以 4-二甲氨基吡啶为催化剂的条件下与盐酸羟胺和乙酸酐发生糖腈乙酰酯反应, 所得衍生物可利用气相色谱测定。二、实验步骤2.1主要实验仪器   GC(毛细管分流进样口, FID检测器)鼓风烘箱(涵盖105℃,可定时8h)涡旋混合仪(2850rpm)离心机(50mL,3650rpm)冷冻干燥机水浴锅(45℃、80℃)旋转蒸发仪(100mL,65℃)离心机(5mL,8000rpm)2.2 实验步骤1、水解:称取约0.5~1.0g的土样于水解管中,沿管壁加入5 mL 6 mol/L盐酸,用氮气置换水解管中空气2min后密封。在烘箱中105℃放置8h水解。2、净化:a) 除酸:待水解液冷却至室温后,加入200μgN-甲基氨基葡萄糖(1mg/mL水溶液,200μL)。涡旋仪震荡30s混匀。取部分水解液于5mL离心管中,于8000rpm离心1min。取上清液2.5mL于50mL离心管中用氮气于65℃吹干。用25mL纯水溶解吹干后的残渣。加0.4mol/LKOH和0.01mol/LHCL调节pH至6.6~6.8。b) 除盐:离心管以3000rpm离心5min,转移出上清液于100mL茄型瓶中,于65℃,25rpm旋转蒸发至干。再加入10mL无水甲醇分两次溶解瓶中残渣。后转移至另一50mL离心管。氮吹至...
发布时间: 2024 - 07 - 15
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发布时间: 2021 - 09 - 26
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实验材料:植物样:青稞种子实验步骤:01:样品提取准确称取0.5g经研磨的样本,放在100ml的烧杯中,先以少量蒸馏水调成糊状,然后加50ml蒸馏水,搅匀,置于50℃恒温水浴中保温20min,使还原糖浸出。离心或过滤,用20ml蒸馏水洗残渣,再离心或过滤,将两次离心的上清液或滤液全部收集在100ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,混匀,作为还原糖待测液。02:制作标准曲线取7支具有25ml刻度的血糖管或刻度试管,编号,按比例精确加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液和3,5-二硝基水杨酸试剂。将各管摇匀,在沸水浴中加热5min,取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温,再以蒸馏水定容至25ml刻度处,用橡皮塞塞住管口,颠倒混匀(如用大试管,则向每管加入21.5ml蒸馏水,混匀)。在540nm波长下,用0号管调零,分别读取1~6号管的消光值。以消光值为纵坐标,葡萄糖mg为横坐标,绘制标准曲线,求得直线方程。03:显色测定取3支25ml刻度试管,编号,分别加入还原糖待测液2ml,3,5-二硝基水杨酸试剂1.5ml,其余操作均与制作标准曲线相同,测定各管的吸光值。04:数据处理  分别在标准曲线上查出相应还原糖mg数,计算还原糖百分含量。◆  ◆  ◆其他还原糖检测方法1、DNS法测各种还原糖标准曲线原理:3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid, DNS)在碱性条件下与还原糖的还原末端反应生成橙黄至棕红色的氨基化合物,在一定范围内,还原糖的量和反应液的颜色强度呈正比例关系。  引伸:植物还原糖检测试剂盒是还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸,3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物。在一定范围内,还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈一定比例关系。测定棕红色物质的吸光度,该吸光度值与还原糖含量呈线性关系,利用比色法和标准曲线测得样品中的还原糖的含量。2、铁氰化钾法根据蔗糖的非还原性,用生成物(葡萄糖和果糖)能够还原菲林溶液中的铜,再根据生成的氧化亚铜的量求出糖的含量。先制备还原糖待测混合液,通过0.1N的硫代硫酸钠滴定,达到当量点前,注入淀粉指示剂滴定至蓝色消失。土壤的转化酶活性,以单位土重的0.1N硫代硫酸钠毫升数(对照与试验测定的差)表示。测各种还原糖标准曲线原理:铁氰化钾[K3Fe(CN)6〕本身为黄色(吸收峰在420nm)左右,而与还原糖反应可生成无色的亚铁氰化钾[K4 Fe( CN)6 ],在一定范围内,还原糖的量和反应液的颜色...
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发布时间: 2021 - 09 - 26
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一般意义上的粗脂肪是指将经前处理的、分散且干燥的样品用乙醚或石油醚等溶剂回流提取,使样品中的脂肪进入溶剂中,回收溶剂后所得到的残留物。今天我们就来分解一下如何通过残余法检测粗脂肪:一、试剂所有试剂除注明者外,均为分析纯。无水乙醚二、主要仪器万分之一天平、索氏提取器三、试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后,按四分法缩减至100g,粉碎,装入样品瓶备用。四、分析步骤4.1 按规定称取试样(M)(准确至0.0001 g),用滤纸包好,在105 C烘箱中干燥3 h取出,在干燥器中冷却,称重(M1)。4.2 将样包装人索氏脂肪抽提器抽提筒中,再倒人无水乙醚,完全浸泡样包,连接好索氏抽提器各部分,浸泡至少16h。4.3 将浸泡后无水乙醚放入抽提瓶中,在抽提瓶中放人几粒沸石,然后,往抽提瓶中倒入无水乙醚使之完全浸泡样包,连接好仪器各部分,接通冷凝水,在70~80 C水浴上加热,使乙醚回流,控制乙醚回流次数为8次/h,即乙醚回滴速度为120~ 150滴/min,抽提6 h。4.4 抽提完毕,取出样包,置样包于通风处使乙醚挥发。将样包放人105C烘箱中干燥2 h,取出,在干燥器中冷却,称重(M2)。五、结果计算脂肪含量=【(M1-M2)/M】x100%式中:M1--为第一次烘干的重量,g;M2--为第二次烘干的重量,g;100%--为换算因数;M--为称取试样的质量,g。
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发布时间: 2021 - 09 - 24
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今天给大家分享一下如何通过比色法对Vc的含量进行测定,如下:一、试剂所有试剂除注明者外,均为分析纯。1. Vc标准液:准确称取抗坏血酸0.1000g,用配好的草酸-EDTA定容至100ml。2. 草酸-EDTA:称取含结晶水的草酸6.3000g,EDTA 0.0584g,充分溶解后定容至1000ml。3. 偏磷酸-乙酸:称取15.0000g偏磷酸于40ml乙酸中,定容至500ml,用滤纸过滤,取滤液备用。4. 5%H2SO4:吸取5ml硫酸稀释至100ml。5.  5%钼酸铵:准确称取钼酸铵25.0000g,定容至500ml。二、主要仪器万分之一分析天平、UV-1800PC紫外可见分光光度计三、试样的制备待测样品混匀后装入塑封袋4℃冷藏备用。四、分析步骤4.1 试样溶液制备称取植物物组织2~5g(根据维生素C含量而定),加5ml草酸-EDTA溶液磨成匀浆,并转入25ml容量瓶中,再用提取介质冲洗研钵及研锤2~3次,冲洗液合并于25ml容量瓶中。取一部分匀浆经3000g离心10min后保存。4.2 标准曲线绘制吸取VC标准溶液 0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0分别置于50mL比色管中,用草酸-EDTA补充至5ml,加入偏磷酸-乙酸0.5ml,加入5%硫酸1ml,再加入5%钼酸铵2ml。加完试剂摇匀后,置30℃水浴中保温15min,用蒸馏水稀释到25 mL刻度,将溶液混匀,用空白管调零,在760nm波长下比色,记录吸光度,以标准维生素C含量为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线。4.3 样品的测定取1ml上清液与标曲同法测定。若样品显色液中出现沉淀时,可过滤后比色,不影响测定结果。五、结果计算植物组织中维生素C的含量(mg)=式中:C——标准曲线上查得样品中维生素含量(mg);Vt——样品提取液总体积(ml);Vs——测定时用样品液体积(ml);FW——植物组织鲜重(g)。【附注】温度对显色有影响,颜色强度随时间的延长而加深,因此显色温度和加入显色剂的时间要求一致。
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发布时间: 2021 - 09 - 23
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一、试剂1.浓磷酸: ρ(H3PO4)= 1.7 1g/ml2.氯化钾溶液 (KCl) =1mol/L (74.55gKCl, 1L水)3.亚硝酸钠: 优级纯,干燥器中干燥24h。①亚硝酸钠标准储备液: p(NO2- N) = 1000mg/ml; (4.926g 亚硝酸钠,适量水溶解,定容至1L) (存于PE瓶中,4℃,6个月)②亚硝酸钠标准使用液1: p(NO2- N)= 100mg/ml; (10ml 储备液。定容至100ml容量瓶)③亚硝酸钠标准使用液2: p(NO2-N)= 10mg/ml; (10ml 使用液1。定容至100ml容量瓶)4.显色剂: ( 20ml磺胺、20ml盐酸萘基溶液、20ml 浓磷酸与100ml去离子水混合,储于棕色试剂瓶中,4℃保存, 溶液变黑时停止使用)①磺胺溶液 (C6H8N2O2S): (1000ml容量瓶中加入600ml水,再加入200ml浓磷酸,再加入80g磺胺,定容,4℃, 1年)②盐酸N- (1萘基) -乙二胺溶液: (0.4g 该物质溶于100ml水中。4℃保存,溶液颜色变深时停止使用)二、主要仪器振荡器 、离心机 、分光光度计三、试样的制备样品采集。样品保存:样应该在4℃下保存和运输,在3日内分析完毕,否则应该在-20℃ (深度冷冻)下保存。试样制备:采集后去除杂物,混匀,过18目筛,一份测定干物质质量,一份测定亚硝态氮试料制备。四、分析步骤4.1 试样溶液提取称取 40g试样(空白不加试样),放入500ml PE瓶中,加入200mlKCl (物液比1:5), 在20C°恒稳水浴振荡器中振荡提取1h。a)转移约60ml提取液,于100ml聚乙烯离心管中,在3000rpm的条件下分离10min。取离心后上清液50ml于100ml比色管中。(或者在4℃下, 以静置4h的方式代替离心分离,制得试料)4.2 空白溶液制备氯化钾溶液4.3 标准曲线绘制将标准使用液2稀释10倍,制得N02-N 1mg/ml标准使用液3,取7支25ml洁净比色管,分别加入标准使用液3:0,0.1,0.3,0.5,0.7,0.9,1.1ml(相当于分别含N02-N 0,0.1,0.3,0.5,0.7,0.9,1.1mg),加20ml水,加0.2ml显色剂,定容至25ml混匀,室温静置60min后于波长540nm处比色,绘制标准曲线4.4 试样测定取样品提取液适量,其余按标曲,于540nm处比色,记录吸光值。五、结果计算式中:C — 从标曲查的样本测量液中NO2-N含量mg;Vt — 提取液总体积ml;Vc — 测量液体积...
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发布时间: 2021 - 09 - 18
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土壤蔗糖酶是作用物β-D-呋喃果糖苷中未还原的β-D-呋喃果糖苷末端残基的水解酶,能酶促土中蔗糖水解成葡萄糖和果糖。今天,我们就来聊聊如何通过靛酚蓝比色法检测土壤蔗糖酶。一.试剂 (1)3,5-二硝基水杨酸溶液:称0.5g二硝基水杨酸,溶于20ml 2N氢氧化钠和50ml水中,再加18.2g酒石酸钾钠,用水稀释至100ml(不超过7天)。  (2)pH5.5磷酸缓冲液:1/15M磷酸氢二钠(11.867g Na2PO4•2H2O溶于1L蒸馏水中)0.5ml加1/15M 磷酸二氢钾(9.078g KH2PO4溶于1L蒸馏水中)9.5ml即成。 (3)8%蔗糖溶液。 (4)甲苯。  (5)标准葡萄糖溶液:将葡萄糖先在50-58℃条件下,真空干燥至恒重。然后取500mg溶于100ml 12mmol苯甲酸溶液中(5mg还原糖/ml),即成标准葡萄糖溶液。 二.主要仪器万分之一分析天平,恒温箱,水浴锅,分光光度计三.试样的制备取新鲜的实验室待测样品充分混匀后,按四分法缩减至 100g,粉碎,然后全部通过 10目孔径筛,装入样品袋备用。 四.分析步骤  4.1 试样溶液提取称取试样2g,精准至0.001g,置于50ml三角瓶中,注入15ml 8%蔗糖溶液,5ml pH5.5磷酸缓冲液和0.25ml甲苯。摇匀混合物后,放入恒温箱,在37℃下培养24h。到时取出,迅速过滤,滤液供蔗糖酶的测定。4.2 空白溶液制备除不加待测样品外,应用的试剂和步骤操作同4.14.3 对照试样溶液制备除用蒸馏水代替蔗糖溶液外,应用的试剂和步骤操作同4.14.4 标准曲线绘制取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml含5mg还原糖/ml的标准葡萄糖溶液到50ml容量瓶中,加3ml 3,5-二硝基水杨酸,并在沸水的水浴锅中加热5min,随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色,最后用蒸馏水稀释至50ml,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。   4.5 试样测定从样品滤液中吸取1ml,若浓度过低,可多取滤液。注入50ml容量量瓶中,加3ml 3,5-二硝基水杨酸,同测定标准曲线同样的方法进行显色比色。     五.结果计算  蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。 葡萄糖(...
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