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土壤氨基糖实验流程如下：一、实验方法及原理氨基糖在吡啶-甲醇溶液中,以 4-二甲氨基吡啶为催化剂的条件下与盐酸羟胺和乙酸酐发生糖腈乙酰酯反应, 所得衍生物可利用气相色谱测定。二、实验步骤2.1主要实验仪器 GC（毛细管分流进样口， FID检测器）鼓风烘箱（涵盖105℃，可定时8h）涡旋混合仪（2850rpm）离心机（50mL，3650rpm）冷冻干燥机水浴锅（45℃、80℃）旋转蒸发仪（100mL，65℃）离心机（5mL，8000rpm）2.2 实验步骤1、水解：称取约0.5~1.0g的土样于水解管中，沿管壁加入5 mL 6 mol/L盐酸，用氮气置换水解管中空气2min后密封。在烘箱中105℃放置8h水解。2、净化：a) 除酸：待水解液冷却至室温后，加入200μgN-甲基氨基葡萄糖（1mg/mL水溶液，200μL）。涡旋仪震荡30s混匀。取部分水解液于5mL离心管中，于8000rpm离心1min。取上清液2.5mL于50mL离心管中用氮气于65℃吹干。用25mL纯水溶解吹干后的残渣。加0.4mol/LKOH和0.01mol/LHCL调节pH至6.6~6.8。b) 除盐：离心管以3000rpm离心5min，转移出上清液于100mL茄型瓶中，于65℃，25rpm旋转蒸发至干。再加入10mL无水甲醇分两次溶解瓶中残渣。后转移至另一50mL离心管。氮吹至...

发布时间: 2024 - 07 - 15

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脯氨酸含量的测定（分光光度计）

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发布时间： 2021 - 12 - 07

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一、试剂所有试剂除注明者外，均为分析纯。1.1 磺基水杨酸：0.6克磺基水杨酸，定容至200ml1.2 酸性茚三酮（现配）：3.75克茚三酮+90ml冰醋酸+36ml蒸馏水1.3 甲苯1.4 脯氨酸标准贮备液：在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯中内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100ug。二、主要仪器万分之一分析天平、水浴锅、分光光度计三、试样的制备取新鲜样本剪碎充分混匀后，装入样本瓶放入4℃冷藏备用。四、分析步骤4.1 试样溶液准备称取鲜样0.3g，加入5ml磺基水杨酸，加盖，沸水浴10分钟，过滤，吸取滤液2ml，加2ml冰醋酸和3ml酸性茚三酮，沸水浴40分钟，冷却，加入5ml甲苯，充分振荡，静止分层，取上层甲苯溶液于比色皿中，520nm下比色。4.2 空白溶液制备除不加试样外，应用的试剂和操作步骤同4.14.3 标准曲线绘制吸取脯氨酸标准溶液,0、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml和3ml用蒸馏水定容至50ml容量瓶中，摇匀，各瓶中脯氨酸的浓度分别为0、1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml、4ug/ml、5ug/ml及6ug/ml的系列标准浓度溶液，取7只试管分别取系列标准浓度的脯氨酸2ml，除不加试样外，其余操作步骤同4.1五、结果计算脯氨酸含量（%）=【C×V/（W×Vt×106）】×100式中：C--为从校准曲线或回归方程求得的2ml测定液中脯氨酸含量，ug/2mlV--为提取液体积，ml；W--为称取试样鲜重的质量，g；Vt--为测量液体积，ml；106、100--为换算因数。

植物激素的测定（高效液相色谱法）

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发布时间： 2021 - 12 - 02

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植物激素是植物细胞接受特定环境信号诱导产生的、低浓度时可调节植物生理反应的活性物质。在细胞分裂与伸长、组织与器官分化、开花与结实、成熟与衰老、休眠与萌发以及离体组织培养等方面，分别或相互协调地调控植物的生长发育与分化。今天便给大家整理了如何通过高效液相色谱法测定植物激素的流程，具体如下：一、实验原理本实验以异丙醇/水/盐酸提取方法提取样品中植物内源激素，以安捷伦1290高效液相色谱仪串联AB公司Qtrap6500质谱仪测定植物内源激素IAA、ABA、IBA、GA1/3/4/7、Z、TZR、IP、IPA、SA、MESA、MEJA、JA。本实验采用异丙醇/水/盐酸溶液的方法，通过提取液加酸提高激素在有机溶剂中溶解性并钝化组织中的部分酶。而后通过二氯甲烷萃取并以氮气吹扫方式浓缩样品，该方法流程相对简单，待测物损失较小，同时由于Qtrap6500仪器的灵敏性，不需过多繁琐的净化步骤即可准确检测大部分痕量待测物。二、试剂2.1异丙醇／盐酸提取缓冲液2.2二氯甲烷2.3 甲醇2.4 0.1%甲酸三、主要仪器台式高速离心机（德国SORVAL公司）AR5120电子天平（美国AHOΜS公司）Aglient1290高效液相色谱仪（美国aglient公司）SCIEX-6500Qtrap(MSMS)（美国AB公司）UYC-200全温培养摇床（上海新苗医疗器械制造公司）氮吹仪（杭州米欧仪器有限公司）四、试样的制备取新鲜样本剪碎充分混匀后，装入样本瓶放入4℃冷藏备用。五、分析步骤5.1激素提取（1）准确称量约1 g新鲜植物样品，于液氮中研磨至粉碎；（2）向粉末中加入10 ml异丙醇／盐酸提取缓冲液，4℃振荡30 min；（3）加入20 ml二氯甲烷，4℃震荡30 min；（4）4℃，13000 r/min离心5 min，取下层有机相；（5）避光，以氮气吹干有机相，以400 µl甲醇（0.1%甲酸）溶解；（6）过0.22 µm滤膜，进HPLC-MS/MS检测。5.2 液质检测（1）标准溶液配制以甲醇（0.1%甲酸）为溶剂配制梯度为0.1 ng/ml，0.2 ng/ml，0.5 ng/ml， 2 ng/ml，5 ng/ml， 20 ng/ml，50 ng/ml，200 ng/ml的IAA、IBA、ABA、GA1/3/4/7、Z、 TZR、IP、IPA、JA、MEJA、SA、MESA标准溶液。每个浓度做2个重复，在实际绘制标曲方程时去掉线性不好的点。（2）液相条件色谱柱：poroshell 120 SB-C18反相色谱柱(2.1×150,2.7 μm)；柱温：30℃...

土壤中微生物量碳氮的测定

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发布时间： 2021 - 11 - 23

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一.试剂1.无乙醇氯仿：氯仿中含有少量乙醇做稳定剂，乙醇会影响氯仿在低压下沸腾。所以需要提纯。提纯：在通风橱中，将氯仿（三氯甲烷）按1:2的体积比与蒸馏水一起加入分液漏斗中，充分摇动1min，慢慢放出下层氯仿于烧杯中，如此重复洗涤三次。得到无乙醇氯仿，加入适量无水氯化钙，去除氯仿中的水分。可重复使用。2.0.5mol/L硫酸钾溶液：称取硫酸钾87.1g，溶于去离子水中，稀释至1000ml3.1mol/L NaoH溶液：称取氢氧化钠（AR）4g，置于一大烧杯中，并立即倒出，然后加入不含CO2的蒸馏水约100mL，将溶液注入细口瓶中，塞紧橡皮塞，混匀，备用。4.沸石二．主要仪器自动有机碳分析仪、真空干燥器、小烧杯（蒸发皿）、中速定量滤纸、漏斗、震荡仪、万分之一分析天平三．试样的制备取新鲜的实验室待测样品充分混匀后，按四分法缩减至 100g，粉碎，然后全部通过10目孔径筛，装入样品袋备用。四. 分析步骤4.1 试样溶液提取4.1.1.称取试样5～10g（相当于干土10g，取部分样测含水量，确定称取土样重量）2份，分别放入25ml小烧杯（培养皿）中。将盛有一份土样的烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约放置烧杯2/3的量）的25ml烧杯，烧杯内放入少量沸石，同时放入盛有1mol/L NaOH溶液的小烧杯（吸收熏蒸过程中释放出来的CO2）。4.1.2.盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿保持沸腾5min。关闭真空干燥阀门，于25度黑暗条件下培养24h。另一份样至于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。4.1.3.熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应该听到空气进入的声音，否则熏蒸不完全，重做，取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5到6次，每次30分钟，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子），直到土壤无氯仿味道为止。4.1.4.从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样，将土样转移到50ml聚乙烯离心管（塑料瓶）中，加入40ml 0.5mol/L 硫酸钾溶液（土水比1：4）800 r/min振荡30分钟，用中速定量滤纸过滤。土壤提取液最好立刻分析，或--20℃冷冻保存，使用前需解冻摇匀。4.2 空白溶液制备取10ml硫酸钾溶液作为空白。4.3 试样测定吸取上述土壤提取液10ml（若浓度过高则稀释）注入自动总有机碳（TOC）分析仪上，测定提取液有机碳、N含量。（仪器使用方法待定）五．结果计算土壤微生物生物量碳： Bc=Ec/KecEc为熏蒸与未熏蒸土壤的差值；Kec为转换系数，取值为0.45土壤微生物生物量氮： Bc=EN/KenEN为熏蒸与未熏蒸...

如何通过比色法测定植物有效磷？

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发布时间： 2021 - 11 - 16

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今天，栢晖生物给大家整理了如何通过比色法测定植物中有效磷的含量，具体流程如下：一、试剂所有试剂除注明者外，均为分析纯。1.1 10%(w/v)的HClO4：取7.874ml 72% 的HClO4定容至100ml。1.2 5%(w/v)的HClO4：取 39.3676ml 72%的HClO4定容至1L。1.3 硫酸-钼酸铵溶液（溶液A）1）溶解1.0g钼酸铵（NH4）6MO7O24·4H2O于约100ml水中； 2）然后徐徐加入6.25ml浓H2SO4（98%）； 3）充分混匀，冷却后定容至250ml。 1.4 10%（w/v）抗坏血酸（VC）溶液（溶液B）：溶解10g抗坏血酸于水中，溶解后定容至100ml，储存于棕色瓶中，4℃保存。 1.5 工作液：按体积比6:1混合溶液A和溶液B注：工作液需要每天配置，现配现用，配好后放置2小时后再使用。1.6 磷标准溶液的配制（60ppm ）:准确称取0.230g磷酸二氢铵（NH4H2PO4）于水中，并定容至100ml，即得600ppm的磷标液。将600ppm的磷标液用提取剂【1:9（10% HClO4：5% HClO4）】稀释10倍，得60ppm的磷标准溶液。二、主要仪器万分之一分析天平、紫外可见分光光度计、恒温振荡机或往返式振荡机、酸度计三、试样的制备取新鲜样本剪碎充分混匀后，装入样本瓶放在4℃备用。四、分析步骤4.1 称取0.5g鲜样称重m，用液氮研磨成粉末。待研钵温度上升后，加入1ml 10%HClO4研磨混匀。 4.2 在研钵中分两次加入4.5mL的5%高氯酸，共计9ml。第一次加入4.5mL 5%高氯酸到研钵中后，将匀浆液转移到新的10ml离心管中；第二次再加入4.5mL 5%高氯酸到研钵中后，尽量洗净研钵中的样品，再将液体继续转移到第一次的10ml离心管中。4.3 在冰上放置30min，每隔5min上下颠倒混匀几次。则样品制备溶液为10ml(V=1ml+9ml=10ml=0.01L) 于4℃，10000g离心10min，取5ml上清液至新的离心管中，用于有效磷的测定（钼蓝法）。 4.4 取1ml(V1)上清液，在上清液中加入2ml的工作液，则反应液为3ml(V2=上清液+工作液)，反应液于40℃温育20min。 4.5 反应液在室温冷却后，观察蓝色深浅，对蓝色过深的样品可适当稀释，地上部一般要稀释5倍。每个样品吸取200ul到酶标板中，于820nm可见光波下用酶标仪测定吸收值。4.6 标准曲线的绘制：将60ppm的磷标液用提取剂稀释，形成稀释标液。再与工作液反应，生成如下系列标准反应液溶液。用...

植物中黄酮的测定——比色法

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发布时间： 2021 - 11 - 12

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深秋时分，银杏叶四处飘散的景象令人着迷，踏上去如行走在棉花糖上...据相关资料显示，银杏叶为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L .的干燥叶。其主要含黄酮类（flavonoids）和萜烯内酯（terpene）类化合物。据医学药理研究证实，银杏叶黄酮具有抗炎症、抗环腺苷酸乙酯酶活性、抗组胺活性等多种效用。今天，栢晖生物就给大家梳理一下如何通过比色法测定植物中黄酮的含量。一、试剂所有试剂除注明者外，均为分析纯。1.1 芦丁对照品、80%乙醇、30%乙醇、1.2 0.05g/ml NaNO2:称取1.7225g亚硝酸钠定容到500ml。1.3 0.1g/ml Al(NO3)3:称取18.7565g硝酸铝定容到500ml。1.4 0.04g/ml NaOH溶液:称取0.8g氢氧化钠定容到500ml。二、主要仪器万分之一分析天平、紫外可见分光光度计三、试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后，粉碎，籽粒全部通过 0.25mm（秸秆通过 0.5mm）孔径筛，装入样品瓶备用。四、分析步骤4.1 试样溶液制备取待测样品，研细，精密称取约0.3g，用80%乙醇回流提取2次（每次用30ml）过滤，滤液合并后蒸干，用30%乙醇溶解并定容至10ml。4.2 标准曲线绘制标准工作曲线的绘制：精密量取芦丁对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml到10ml容量瓶中，各加入30%乙醇至1.0ml，加入0.5ml 0.05g/ml NaNO2溶液，放置6min后再加入0.3ml0.1g/ml Al(NO3)3溶液，摇匀，放置6min后加入3ml 0.04g/ml NaOH溶液，用水定容至标线，摇匀，放置15min，在510nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁对照品溶液的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。4.3 样品的测定精密量取样品溶液1.0ml，置于10ml容量瓶中，按照标准工作曲线绘制的方法，自加入0.5ml 0.05g/ml NaNO2溶液起依次测定吸光度，从标准工作曲线上查得样品溶液中芦丁的浓度，作为总黄酮的浓度，再计算求得总黄酮的含量。五、结果计算式中:C——从标准曲线查得黄酮的含量，μg/g；N——稀释倍数；Vt——提取液总体积，ml；Vs——测定取液量，ml；0.001——将μg换算为mg；m——样品称重量。所得结果应保留小数点后三位

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