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一、微生物碳利用效率的概念及其环境意义微生物碳利用效率（CUE）：微生物分配给生长的碳量占吸收总碳量的比率，体现了微生物合成代谢和分解代谢之间的平衡。二、微生物碳利用效率测定的原理设置18O标记处理以及加入等量自然丰度水的对照组，通过培养过后DNA中18O丰度的差值来判读加入土壤的标记水有多少进入了新产生的DNA中，由此估算微生物生长速率。测定方法——18O-H2O培养法：试样的准备：收集200g左右田间土壤样品，混匀，将其中的大约100g土壤鲜样通过2mm 孔径筛，去除石头和肉眼可见的根等杂质，装入聚乙烯样品袋备用。预培养：*土壤野外采回后迅速过2mm筛，去除土壤内石块、根系、凋落物等；*烘干法测量土壤含水量土壤；*尽快将过筛后土壤熏蒸浸提法测量微生物MBC；（1）田间持水率的测定调整土壤含水量到60%田间持水量（WHC，water holding capacity）；将土壤放入实验所需温度培养箱进行预培养，预培养时间遵照实验设计（2）预培养土样控水处理18O标记培养一个样本一个对照组，或根据样本情况挑选20%样品做对照土壤DNA的提取野外采集土壤带回实验室迅速分装冻干提取DNA，并测得DNA含量。18O丰度测定吸取DNA提取液于洁净的银囊（已称重）中并置于60℃烘箱中干燥整夜后（称重）包好，用质谱仪测定18O丰度和总氧含量。MBC测定氯仿熏蒸提取法...计算更多检测相关讯息s...

发布时间: 2024 - 09 - 10

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如何通过残重法测定植物中的粗纤维？（附详细方法）

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发布时间： 2021 - 12 - 27

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之前，栢晖生物给大家整理分享过粗脂肪、粗灰分等指标的测定方法，今天咱们来看看如何通过残重法测定植物中的粗纤维。试验流程如下：一、试剂所有试剂除注明者外，均为分析纯。1.1 1.25%硫酸：取相对密度1.84的浓硫酸13.0ml 加水稀释至1L。1.2 1.25%氢氧化钾溶液二、主要仪器万分之一分析天平、电热板、锥形瓶三、试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后，按四分法缩减至 100g，粉碎，籽粒全部通过20目筛，装入样品瓶备用。四、分析步骤4.1 称取干燥样品1-3.0g，移入500ml锥形瓶中，加入200ml煮沸的1.25%硫酸，加热使其微沸，保持体积恒定，维持30min，期间每隔5min摇动锥形瓶一次，充分混合瓶内物质。4.2 去下锥形瓶后用带有已知质量滤纸的漏斗过滤，并用热蒸馏水冲洗锥形瓶及漏斗，直至滤液用石蕊试纸测定为中性反应为止。4.3 再用200ml煮沸的1.25%氢氧化钾溶液将滤纸上的沉淀物完全洗入原锥形瓶内，将其加热至沸腾再继续30min，操作同4.1。4.4 煮沸后冷却，用原来所用已知质量的滤纸，用蒸馏水冲洗2~3次，再用乙醇和乙醚各洗涤一次。4.5 将滤纸和沉淀在100~105℃的烘箱中烘至恒重并称重。五、结果计算粗纤维含量（%）=（M1/M2）×100%式中：M1--为烘干后残余物的质量，g；M2--为试样的质量，；100--换算因数。来源：栢晖生物整理。

脯氨酸含量的测定（分光光度计）

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发布时间： 2021 - 12 - 07

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一、试剂所有试剂除注明者外，均为分析纯。1.1 磺基水杨酸：0.6克磺基水杨酸，定容至200ml1.2 酸性茚三酮（现配）：3.75克茚三酮+90ml冰醋酸+36ml蒸馏水1.3 甲苯1.4 脯氨酸标准贮备液：在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯中内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每ml含脯氨酸100ug。二、主要仪器万分之一分析天平、水浴锅、分光光度计三、试样的制备取新鲜样本剪碎充分混匀后，装入样本瓶放入4℃冷藏备用。四、分析步骤4.1 试样溶液准备称取鲜样0.3g，加入5ml磺基水杨酸，加盖，沸水浴10分钟，过滤，吸取滤液2ml，加2ml冰醋酸和3ml酸性茚三酮，沸水浴40分钟，冷却，加入5ml甲苯，充分振荡，静止分层，取上层甲苯溶液于比色皿中，520nm下比色。4.2 空白溶液制备除不加试样外，应用的试剂和操作步骤同4.14.3 标准曲线绘制吸取脯氨酸标准溶液,0、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml和3ml用蒸馏水定容至50ml容量瓶中，摇匀，各瓶中脯氨酸的浓度分别为0、1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml、4ug/ml、5ug/ml及6ug/ml的系列标准浓度溶液，取7只试管分别取系列标准浓度的脯氨酸2ml，除不加试样外，其余操作步骤同4.1五、结果计算脯氨酸含量（%）=【C×V/（W×Vt×106）】×100式中：C--为从校准曲线或回归方程求得的2ml测定液中脯氨酸含量，ug/2mlV--为提取液体积，ml；W--为称取试样鲜重的质量，g；Vt--为测量液体积，ml；106、100--为换算因数。

植物激素的测定（高效液相色谱法）

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发布时间： 2021 - 12 - 02

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植物激素是植物细胞接受特定环境信号诱导产生的、低浓度时可调节植物生理反应的活性物质。在细胞分裂与伸长、组织与器官分化、开花与结实、成熟与衰老、休眠与萌发以及离体组织培养等方面，分别或相互协调地调控植物的生长发育与分化。今天便给大家整理了如何通过高效液相色谱法测定植物激素的流程，具体如下：一、实验原理本实验以异丙醇/水/盐酸提取方法提取样品中植物内源激素，以安捷伦1290高效液相色谱仪串联AB公司Qtrap6500质谱仪测定植物内源激素IAA、ABA、IBA、GA1/3/4/7、Z、TZR、IP、IPA、SA、MESA、MEJA、JA。本实验采用异丙醇/水/盐酸溶液的方法，通过提取液加酸提高激素在有机溶剂中溶解性并钝化组织中的部分酶。而后通过二氯甲烷萃取并以氮气吹扫方式浓缩样品，该方法流程相对简单，待测物损失较小，同时由于Qtrap6500仪器的灵敏性，不需过多繁琐的净化步骤即可准确检测大部分痕量待测物。二、试剂2.1异丙醇／盐酸提取缓冲液2.2二氯甲烷2.3 甲醇2.4 0.1%甲酸三、主要仪器台式高速离心机（德国SORVAL公司）AR5120电子天平（美国AHOΜS公司）Aglient1290高效液相色谱仪（美国aglient公司）SCIEX-6500Qtrap(MSMS)（美国AB公司）UYC-200全温培养摇床（上海新苗医疗器械制造公司）氮吹仪（杭州米欧仪器有限公司）四、试样的制备取新鲜样本剪碎充分混匀后，装入样本瓶放入4℃冷藏备用。五、分析步骤5.1激素提取（1）准确称量约1 g新鲜植物样品，于液氮中研磨至粉碎；（2）向粉末中加入10 ml异丙醇／盐酸提取缓冲液，4℃振荡30 min；（3）加入20 ml二氯甲烷，4℃震荡30 min；（4）4℃，13000 r/min离心5 min，取下层有机相；（5）避光，以氮气吹干有机相，以400 µl甲醇（0.1%甲酸）溶解；（6）过0.22 µm滤膜，进HPLC-MS/MS检测。5.2 液质检测（1）标准溶液配制以甲醇（0.1%甲酸）为溶剂配制梯度为0.1 ng/ml，0.2 ng/ml，0.5 ng/ml， 2 ng/ml，5 ng/ml， 20 ng/ml，50 ng/ml，200 ng/ml的IAA、IBA、ABA、GA1/3/4/7、Z、 TZR、IP、IPA、JA、MEJA、SA、MESA标准溶液。每个浓度做2个重复，在实际绘制标曲方程时去掉线性不好的点。（2）液相条件色谱柱：poroshell 120 SB-C18反相色谱柱(2.1×150,2.7 μm)；柱温：30℃...

土壤中微生物量碳氮的测定

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发布时间： 2021 - 11 - 23

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一.试剂1.无乙醇氯仿：氯仿中含有少量乙醇做稳定剂，乙醇会影响氯仿在低压下沸腾。所以需要提纯。提纯：在通风橱中，将氯仿（三氯甲烷）按1:2的体积比与蒸馏水一起加入分液漏斗中，充分摇动1min，慢慢放出下层氯仿于烧杯中，如此重复洗涤三次。得到无乙醇氯仿，加入适量无水氯化钙，去除氯仿中的水分。可重复使用。2.0.5mol/L硫酸钾溶液：称取硫酸钾87.1g，溶于去离子水中，稀释至1000ml3.1mol/L NaoH溶液：称取氢氧化钠（AR）4g，置于一大烧杯中，并立即倒出，然后加入不含CO2的蒸馏水约100mL，将溶液注入细口瓶中，塞紧橡皮塞，混匀，备用。4.沸石二．主要仪器自动有机碳分析仪、真空干燥器、小烧杯（蒸发皿）、中速定量滤纸、漏斗、震荡仪、万分之一分析天平三．试样的制备取新鲜的实验室待测样品充分混匀后，按四分法缩减至 100g，粉碎，然后全部通过10目孔径筛，装入样品袋备用。四. 分析步骤4.1 试样溶液提取4.1.1.称取试样5～10g（相当于干土10g，取部分样测含水量，确定称取土样重量）2份，分别放入25ml小烧杯（培养皿）中。将盛有一份土样的烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约放置烧杯2/3的量）的25ml烧杯，烧杯内放入少量沸石，同时放入盛有1mol/L NaOH溶液的小烧杯（吸收熏蒸过程中释放出来的CO2）。4.1.2.盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿保持沸腾5min。关闭真空干燥阀门，于25度黑暗条件下培养24h。另一份样至于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。4.1.3.熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应该听到空气进入的声音，否则熏蒸不完全，重做，取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5到6次，每次30分钟，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子），直到土壤无氯仿味道为止。4.1.4.从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样，将土样转移到50ml聚乙烯离心管（塑料瓶）中，加入40ml 0.5mol/L 硫酸钾溶液（土水比1：4）800 r/min振荡30分钟，用中速定量滤纸过滤。土壤提取液最好立刻分析，或--20℃冷冻保存，使用前需解冻摇匀。4.2 空白溶液制备取10ml硫酸钾溶液作为空白。4.3 试样测定吸取上述土壤提取液10ml（若浓度过高则稀释）注入自动总有机碳（TOC）分析仪上，测定提取液有机碳、N含量。（仪器使用方法待定）五．结果计算土壤微生物生物量碳： Bc=Ec/KecEc为熏蒸与未熏蒸土壤的差值；Kec为转换系数，取值为0.45土壤微生物生物量氮： Bc=EN/KenEN为熏蒸与未熏蒸...

如何通过比色法测定植物有效磷？

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发布时间： 2021 - 11 - 16

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今天，栢晖生物给大家整理了如何通过比色法测定植物中有效磷的含量，具体流程如下：一、试剂所有试剂除注明者外，均为分析纯。1.1 10%(w/v)的HClO4：取7.874ml 72% 的HClO4定容至100ml。1.2 5%(w/v)的HClO4：取 39.3676ml 72%的HClO4定容至1L。1.3 硫酸-钼酸铵溶液（溶液A）1）溶解1.0g钼酸铵（NH4）6MO7O24·4H2O于约100ml水中； 2）然后徐徐加入6.25ml浓H2SO4（98%）； 3）充分混匀，冷却后定容至250ml。 1.4 10%（w/v）抗坏血酸（VC）溶液（溶液B）：溶解10g抗坏血酸于水中，溶解后定容至100ml，储存于棕色瓶中，4℃保存。 1.5 工作液：按体积比6:1混合溶液A和溶液B注：工作液需要每天配置，现配现用，配好后放置2小时后再使用。1.6 磷标准溶液的配制（60ppm ）:准确称取0.230g磷酸二氢铵（NH4H2PO4）于水中，并定容至100ml，即得600ppm的磷标液。将600ppm的磷标液用提取剂【1:9（10% HClO4：5% HClO4）】稀释10倍，得60ppm的磷标准溶液。二、主要仪器万分之一分析天平、紫外可见分光光度计、恒温振荡机或往返式振荡机、酸度计三、试样的制备取新鲜样本剪碎充分混匀后，装入样本瓶放在4℃备用。四、分析步骤4.1 称取0.5g鲜样称重m，用液氮研磨成粉末。待研钵温度上升后，加入1ml 10%HClO4研磨混匀。 4.2 在研钵中分两次加入4.5mL的5%高氯酸，共计9ml。第一次加入4.5mL 5%高氯酸到研钵中后，将匀浆液转移到新的10ml离心管中；第二次再加入4.5mL 5%高氯酸到研钵中后，尽量洗净研钵中的样品，再将液体继续转移到第一次的10ml离心管中。4.3 在冰上放置30min，每隔5min上下颠倒混匀几次。则样品制备溶液为10ml(V=1ml+9ml=10ml=0.01L) 于4℃，10000g离心10min，取5ml上清液至新的离心管中，用于有效磷的测定（钼蓝法）。 4.4 取1ml(V1)上清液，在上清液中加入2ml的工作液，则反应液为3ml(V2=上清液+工作液)，反应液于40℃温育20min。 4.5 反应液在室温冷却后，观察蓝色深浅，对蓝色过深的样品可适当稀释，地上部一般要稀释5倍。每个样品吸取200ul到酶标板中，于820nm可见光波下用酶标仪测定吸收值。4.6 标准曲线的绘制：将60ppm的磷标液用提取剂稀释，形成稀释标液。再与工作液反应，生成如下系列标准反应液溶液。用...

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