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土壤氨基糖实验流程如下：一、实验方法及原理氨基糖在吡啶-甲醇溶液中,以 4-二甲氨基吡啶为催化剂的条件下与盐酸羟胺和乙酸酐发生糖腈乙酰酯反应, 所得衍生物可利用气相色谱测定。二、实验步骤2.1主要实验仪器 GC（毛细管分流进样口， FID检测器）鼓风烘箱（涵盖105℃，可定时8h）涡旋混合仪（2850rpm）离心机（50mL，3650rpm）冷冻干燥机水浴锅（45℃、80℃）旋转蒸发仪（100mL，65℃）离心机（5mL，8000rpm）2.2 实验步骤1、水解：称取约0.5~1.0g的土样于水解管中，沿管壁加入5 mL 6 mol/L盐酸，用氮气置换水解管中空气2min后密封。在烘箱中105℃放置8h水解。2、净化：a) 除酸：待水解液冷却至室温后，加入200μgN-甲基氨基葡萄糖（1mg/mL水溶液，200μL）。涡旋仪震荡30s混匀。取部分水解液于5mL离心管中，于8000rpm离心1min。取上清液2.5mL于50mL离心管中用氮气于65℃吹干。用25mL纯水溶解吹干后的残渣。加0.4mol/LKOH和0.01mol/LHCL调节pH至6.6~6.8。b) 除盐：离心管以3000rpm离心5min，转移出上清液于100mL茄型瓶中，于65℃，25rpm旋转蒸发至干。再加入10mL无水甲醇分两次溶解瓶中残渣。后转移至另一50mL离心管。氮吹至...

发布时间: 2024 - 07 - 15

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植物中黄酮的测定——比色法

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发布时间： 2021 - 11 - 12

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深秋时分，银杏叶四处飘散的景象令人着迷，踏上去如行走在棉花糖上...据相关资料显示，银杏叶为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L .的干燥叶。其主要含黄酮类（flavonoids）和萜烯内酯（terpene）类化合物。据医学药理研究证实，银杏叶黄酮具有抗炎症、抗环腺苷酸乙酯酶活性、抗组胺活性等多种效用。今天，栢晖生物就给大家梳理一下如何通过比色法测定植物中黄酮的含量。一、试剂所有试剂除注明者外，均为分析纯。1.1 芦丁对照品、80%乙醇、30%乙醇、1.2 0.05g/ml NaNO2:称取1.7225g亚硝酸钠定容到500ml。1.3 0.1g/ml Al(NO3)3:称取18.7565g硝酸铝定容到500ml。1.4 0.04g/ml NaOH溶液:称取0.8g氢氧化钠定容到500ml。二、主要仪器万分之一分析天平、紫外可见分光光度计三、试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后，粉碎，籽粒全部通过 0.25mm（秸秆通过 0.5mm）孔径筛，装入样品瓶备用。四、分析步骤4.1 试样溶液制备取待测样品，研细，精密称取约0.3g，用80%乙醇回流提取2次（每次用30ml）过滤，滤液合并后蒸干，用30%乙醇溶解并定容至10ml。4.2 标准曲线绘制标准工作曲线的绘制：精密量取芦丁对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml到10ml容量瓶中，各加入30%乙醇至1.0ml，加入0.5ml 0.05g/ml NaNO2溶液，放置6min后再加入0.3ml0.1g/ml Al(NO3)3溶液，摇匀，放置6min后加入3ml 0.04g/ml NaOH溶液，用水定容至标线，摇匀，放置15min，在510nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，芦丁对照品溶液的浓度为横坐标，绘制标准工作曲线。4.3 样品的测定精密量取样品溶液1.0ml，置于10ml容量瓶中，按照标准工作曲线绘制的方法，自加入0.5ml 0.05g/ml NaNO2溶液起依次测定吸光度，从标准工作曲线上查得样品溶液中芦丁的浓度，作为总黄酮的浓度，再计算求得总黄酮的含量。五、结果计算式中:C——从标准曲线查得黄酮的含量，μg/g；N——稀释倍数；Vt——提取液总体积，ml；Vs——测定取液量，ml；0.001——将μg换算为mg；m——样品称重量。所得结果应保留小数点后三位

检测方法| 如何通过碱解扩散法测定土壤水解性氮？

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发布时间： 2021 - 11 - 01

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土壤中氮的来源一般有以下几方面：施入土壤中的化学氮肥和有机肥料、动植物残体的归还、生物固氮、雷电降雨带来的等等，目前，施入土壤中的肥料是土壤氮的主要来源。今天栢晖生物给大家整理了如何通过碱解扩散法测定土壤水解性氮一、试剂(1)1.0mol/L氢氧化钠溶液：称取化学纯氢氧化钠40 g，用蒸馏水溶解后冷却定容到1000 ml。(2)1.2mol/L氢氧化钠溶液：称取化学纯氢氧化钠48 g,用蒸馏水溶解定容到1000 ml。(3)1.8mol/L氢氧化钠溶液：称取化学纯氢氧化钠72 g，用蒸馏水溶解后冷却定容到1000 ml。 (4)2%硼酸溶液：称取20 g硼酸，用热蒸馏水(约60℃)溶解，冷却后稀释至1000ml，用稀盐酸或稀氢氧化钠调节pH至4.5(定氮混合指示剂显葡萄酒红色)。 (5)0.005mol/L（1/2 H2SO4）硫酸标准溶液：量取H2SO4 2.83 mL，加蒸馏水稀释至5000 mL，然后用标准碱或硼酸标定之，此为0.0200mol/L（1/2 H2SO4）标准溶液，再将此标准溶液准确的稀释4倍，即得0.0050mol/L（1/2 H2SO4）的标准液。(6)定氮混合指示剂：0.5g溴甲酚绿和0.1g甲基红溶于100ml乙醇中。 (7)特制胶水：阿拉伯胶(称取40g粉状阿拉伯胶，溶于50 ml蒸馏水中)在烧杯中热温至70—80℃，搅拌促溶，约1小时后放冷。加入甘油20 mL，饱和碳酸钾水溶液20 mL，搅拌、放冷。离心去除泡沫和不溶物，清液贮于具塞玻璃瓶中备用。(最好放置在盛有浓硫酸的干燥器中以除去氨) (8)硫酸亚铁(粉状) ：将分析纯硫酸亚铁磨细保存于阴凉干燥处。二、主要仪器扩散皿、微量滴定管、1/1000分析天平、恒温箱、玻璃棒、毛玻璃、皮筋、吸管(2 ml和10 ml)，腊光纸、角匙、瓷盘。三、试样的制备称取通过18号筛(孔径1 mm)风干样品2.000 g(精确到0.001g)和1 g硫酸亚铁粉剂，均匀铺在扩散皿外室内，水平地轻轻旋转扩散皿，使样品铺平。(水稻土样品则不必加硫酸亚铁。) 四、分析步骤1. 用吸管吸取2%硼酸溶液2 ml，加入扩散皿内室，并滴加1滴定氮混合指示剂，然后在皿的外室边缘涂上特制胶水，盖上毛玻璃，并旋转数次，以便毛玻璃与皿边完全粘合，再慢慢转开毛玻璃的一边，使扩散皿露出一条狭缝，迅速用移液管加入10 ml 1.8 mol/L氢氧化钠于皿的外室(水稻土样品则加入10 ml 1.2 mol/L氢氧化钠)，立即用毛玻璃盖严。2. 水平...

检测方法：如何通过考马斯亮蓝染色法测定植物可溶性蛋白

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发布时间： 2021 - 10 - 29

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可溶性蛋白指可以以小分子状态溶于水或其他溶剂的蛋白。通常在植物生理、微生物、食品加工等实验中作为重要指标。如可溶性蛋白是植物抗旱性的重要指标之一。今天栢晖生物就给大家分享一下如何通过考马斯亮蓝染色法测定植物中的可溶性蛋白：“1试剂所有试剂除注明者外，均为分析纯。1.1 考马斯亮蓝溶液配制：称取100 mg考马斯亮蓝，溶于50ml 90%乙醇中，加入100ml 85%（W/V）磷酸，再用蒸馏水定容到1L。在过夜后过滤并贮于棕色瓶中，常温下可保存一个月。1.2 90% 乙醇1.3 100 g/ml 牛血清蛋白（BSA）标准溶液：称取10mg BSA定容至100 ml即为100 g/ml。或称取25 mg BSA加蒸馏水水溶解后定容至100 ml，再从中吸取40 ml蒸馏水定容至100ml。1.4 0.05 mol/LpH7.8磷酸配制：A母液，0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液：取Na2HPO4·12H2O (分子量358.14)35.85 g，用蒸馏水定容至500 ml。B母液，0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O (分子量156.01)1.5601 g，用蒸馏水定容到50 ml。1.5 0.05M pH7.8磷酸：分别取A母液228.75ml，B母液21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。“2主要仪器万分之一分析天平、紫外可见分光光度计、离心机“3试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后，籽粒全部通过 0.25mm（秸秆通过 0.5mm）孔径筛，装入样品瓶备用。“4分析步骤4.1 试样溶液制备样品提取：取鲜样0.2—0.5g，用蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000r/min—4000r/min离心10min，上清液备用。4.2 标准曲线绘制取6支具塞试管，依次加入标液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，然后用蒸馏水补充至1ml，再向各管中加入5ml考马斯亮蓝试剂，5min左右，以0号试管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度，以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。4.3 样品的测定吸取样品提取液1.0ml（视蛋白质含量适当稀释），放入试管中（每个样品重复两次），加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min待反应完成，在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查蛋白质含量。“5结果计算式中：C—查标准曲线值，g；Vt—提取液总体积，ml；WF—样品鲜重，g；Vs—测定时加样量，ml所得结果应保留小数点后三位

检测方法——如何通过灼烧法测定植物粗灰分？

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发布时间： 2021 - 10 - 08

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植物体经灼烧后其中的水分被全部除去，干物质被炭化分解，蕞后的残留物称为“粗灰分”。植物干物质中粗灰分的含量，随植物种类、品种、不同器官和部位、生育期以及生长环境和其他农业技术措施等因素而变动，但一般为2～7％，平均约5％。测定粗灰分的含量，可以了解各种植物在不同生育期和不同器官中养分吸收和累积状况以及土壤、施肥、气候、栽培管理等因素对植物灰分含量变化的影响。并且也是农产品及其加工产品的品质检定项目之一。今天栢晖生物给大家整理了如何通过灼烧法测定植物粗灰分：一、方法概要称量一定质量的试样，在550℃~600℃高温下灼烧。是有机化合物分解挥发，矿物成分转化为氧化物或碳酸盐，统称粗灰分，用重量法测定。二、主要仪器万分之一天平、瓷坩埚、干燥剂、马弗炉三、试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后，按四分法缩减至 100g，粉碎，籽粒全部通过 0.25mm（秸秆通过 0.5mm）孔径筛，装入样品瓶备用。四、操作步骤将坩埚放入马弗炉中，于550℃下灼烧30min，待炉降温至200℃后，将坩埚移入干燥器中，冷却至室温后称量（M0）4.2 称取5.0g试样于已恒重的坩埚中称重（M1）4.3 将其移入预先加热到550℃的马弗炉中灼烧3h，直至试样完全灰化，无黑色炭粒，断电，立即取出坩埚，室温冷却2~3min，干燥器内平衡30min，称重（M2）五、结果计算粗灰分(g·kg-1) = （M2-M0）/（M1-M0）×1000式中：粗灰分—植物粗灰分 M0--瓷坩埚质量，g ； M1--瓷坩埚加试样重量，g ； M2--瓷坩埚加粗灰分质量，g；1000--换算因数。

还原糖含量检测方法对比

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发布时间： 2021 - 09 - 26

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实验材料：植物样：青稞种子实验步骤：01：样品提取准确称取0.5g经研磨的样本，放在100ml的烧杯中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。离心或过滤，用20ml蒸馏水洗残渣，再离心或过滤，将两次离心的上清液或滤液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。02：制作标准曲线取7支具有25ml刻度的血糖管或刻度试管，编号，按比例精确加入浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液和3,5-二硝基水杨酸试剂。将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25ml刻度处，用橡皮塞塞住管口，颠倒混匀（如用大试管，则向每管加入21.5ml蒸馏水，混匀）。在540nm波长下，用0号管调零，分别读取1～6号管的消光值。以消光值为纵坐标，葡萄糖mg为横坐标，绘制标准曲线，求得直线方程。03：显色测定取3支25ml刻度试管，编号，分别加入还原糖待测液2ml，3,5-二硝基水杨酸试剂1.5ml，其余操作均与制作标准曲线相同，测定各管的吸光值。04：数据处理分别在标准曲线上查出相应还原糖mg数，计算还原糖百分含量。◆ ◆ ◆其他还原糖检测方法1、DNS法测各种还原糖标准曲线原理:3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid, DNS)在碱性条件下与还原糖的还原末端反应生成橙黄至棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈正比例关系。引伸：植物还原糖检测试剂盒是还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物。在一定范围内，还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈一定比例关系。测定棕红色物质的吸光度，该吸光度值与还原糖含量呈线性关系，利用比色法和标准曲线测得样品中的还原糖的含量。2、铁氰化钾法根据蔗糖的非还原性，用生成物（葡萄糖和果糖）能够还原菲林溶液中的铜，再根据生成的氧化亚铜的量求出糖的含量。先制备还原糖待测混合液，通过0.1N的硫代硫酸钠滴定，达到当量点前，注入淀粉指示剂滴定至蓝色消失。土壤的转化酶活性，以单位土重的0.1N硫代硫酸钠毫升数（对照与试验测定的差）表示。测各种还原糖标准曲线原理:铁氰化钾[K3Fe(CN)6〕本身为黄色(吸收峰在420nm)左右，而与还原糖反应可生成无色的亚铁氰化钾[K4 Fe( CN)6 ]，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色...

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