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发布时间: 2023 - 08 - 01
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发布时间: 2021 - 09 - 18
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土壤蔗糖酶是作用物β-D-呋喃果糖苷中未还原的β-D-呋喃果糖苷末端残基的水解酶,能酶促土中蔗糖水解成葡萄糖和果糖。今天,我们就来聊聊如何通过靛酚蓝比色法检测土壤蔗糖酶。一.试剂 (1)3,5-二硝基水杨酸溶液:称0.5g二硝基水杨酸,溶于20ml 2N氢氧化钠和50ml水中,再加18.2g酒石酸钾钠,用水稀释至100ml(不超过7天)。  (2)pH5.5磷酸缓冲液:1/15M磷酸氢二钠(11.867g Na2PO4•2H2O溶于1L蒸馏水中)0.5ml加1/15M 磷酸二氢钾(9.078g KH2PO4溶于1L蒸馏水中)9.5ml即成。 (3)8%蔗糖溶液。 (4)甲苯。  (5)标准葡萄糖溶液:将葡萄糖先在50-58℃条件下,真空干燥至恒重。然后取500mg溶于100ml 12mmol苯甲酸溶液中(5mg还原糖/ml),即成标准葡萄糖溶液。 二.主要仪器万分之一分析天平,恒温箱,水浴锅,分光光度计三.试样的制备取新鲜的实验室待测样品充分混匀后,按四分法缩减至 100g,粉碎,然后全部通过 10目孔径筛,装入样品袋备用。 四.分析步骤  4.1 试样溶液提取称取试样2g,精准至0.001g,置于50ml三角瓶中,注入15ml 8%蔗糖溶液,5ml pH5.5磷酸缓冲液和0.25ml甲苯。摇匀混合物后,放入恒温箱,在37℃下培养24h。到时取出,迅速过滤,滤液供蔗糖酶的测定。4.2 空白溶液制备除不加待测样品外,应用的试剂和步骤操作同4.14.3 对照试样溶液制备除用蒸馏水代替蔗糖溶液外,应用的试剂和步骤操作同4.14.4 标准曲线绘制取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml含5mg还原糖/ml的标准葡萄糖溶液到50ml容量瓶中,加3ml 3,5-二硝基水杨酸,并在沸水的水浴锅中加热5min,随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色,最后用蒸馏水稀释至50ml,并在分光光度计上于波长508nm处进行比色。   4.5 试样测定从样品滤液中吸取1ml,若浓度过低,可多取滤液。注入50ml容量量瓶中,加3ml 3,5-二硝基水杨酸,同测定标准曲线同样的方法进行显色比色。     五.结果计算  蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示。 葡萄糖(...
作者: 土壤微生物组
发布时间: 2021 - 09 - 17
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文献分享       农业实践可以驱动植物相关微生物群落的组成,使植物适应生物和非生物胁迫。研究表明,施用除草剂、杀虫剂和耕作措施可导致根际微生物群落组成的变化,从而影响作物生长表现。通过对单作植物和轮作植物的比较,发现前者的微生物多样性最低。然而,连续单作的影响并不一定是负面的,因为不仅病原体的增加,而且病原体的拮抗微生物也可能富集。我们对种植制度如何影响根际微生物群落的理解仍然有限。这个研究揭示了农业栽培历史对与当前作物相关的根际微生物区系的重要影响,表明了根际微生物组的组装与植物生长表现相关。连续单作后在作物根际富集的物种可能导致作物根际在栽培土壤中的群落功能下降。这可能涉及植物激素信号转导的调控,从而对作物生长产生影响。总之,文中所提出的结果提供了土地利用历史通过选择特定的根际分类群对植物表型的影响,为未来植物微生物组影响作物生长的研究提供了基础。主要内容      根系相关的微生物被认为是植物表型的一部分,在植物养分吸收、产生生长激素和防御方面起着重要作用。由于作物有选择地从土体土壤中富集大多数根际微生物,我们假设由农业管理引起的土体土壤群落组成的变化影响植物生长表现。在本研究中,我们对具有不同的管理历史(花生单作和作物轮作)花生根际微生物组进行了宏基因组测序,并宏转录组分析。我们发现,过去的种植历史影响花生根际微生物群落的组装,表明了土壤记忆效应。单作导致根际微生物多样性的降低,几种稀有物种的富集以及与植物性能相关基因的表达减少,如营养物质代谢和植物激素生物合成。此外,单作土壤中的花生植株的生长显著减少,与激素产生相关基因(主要是生长素和细胞分裂素)的下调和脱落酸、水杨酸、茉莉酸和乙烯途径有关的基因的上调相关。这些发现表明,土地利用历史影响作物根际微生物群落和生长表现。参考文献Li, X., Jousset, A., de Boer, W., Carrión, V. J., Zhang, T., Wang, X., & Kuramae, E. E. (2018). Legacy of land use history determines reprogramming of plant physiology by soil microbiome. The ISME Journal. doi:10.1038/s41396-018-0300-0.
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发布时间: 2021 - 09 - 17
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一、 试剂:1、0.2mol/l盐酸溶液2、0.1mol/l氢氧化钠溶液3、酚酞指示剂二、 主要仪器:电热板,锥形瓶三、 试样的制备:取风干的实验室待测样品充分混匀后,取待测样品充分混匀后,按四分法缩减至100g,粉碎,然后全部通过60目孔径筛,装入样品袋备用。 四、 分析步骤:称取适量土壤样本,放入150ml锥形瓶中,然后准确加入0.2mol/l盐酸溶液10ml,轻轻摇匀,放置过夜,使之彻底反应。将锥形瓶放于电热板上微沸3-5分钟以除去溶液中CO2,冷后用滤纸过滤,并用除去CO2的去离子水洗涤数次,收集所有滤液,加3滴酚酞指示剂,将滤液微热后用0.1 mol/l氢氧化钠溶液滴定至粉红色即为终点。五、 结果计算:C1、C2—HCL与NaOH钠溶液浓度(mol/l);V1、V2—HCL与NaOH钠溶液体积(ml);M—土壤样品质量(g);0.05—1/2CaCO3摩尔质量(kg/mol)。 参考文献:鲍士旦.土壤农化分析.北京:中国农业出版社,1999:30-33,201-205
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发布时间: 2021 - 09 - 14
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果糖是一种单糖,是葡萄糖的同分异构体,分子式为C6H12O6。它有一下一些特征:以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中,还能与葡萄糖结合生成蔗糖;纯净的果糖为无色晶体,熔点为103~105℃,它不易结晶,通常为黏稠性液体,易溶于水、乙醇和乙醚。以下给大家分享下如何通过间苯二酚比色法检测植物中的果糖。一、实验试剂所有试剂除注明者外,均为分析纯。1.1  0.1%间苯二酚: 称取0.1g间苯二酚溶液于100mL 95%乙醇溶液(棕色瓶内保存);1.2 标准果糖溶液:称取50mg烘至衡重的果糖,用80%乙醇配成1000ml溶液,得到质量浓度为50ug/ml的果糖溶液;1.3 80%乙醇;1.4 浓盐酸。二、实验仪器分光光度计、恒温水浴锅、电子天平、烘箱、刻度离心管、带塞试管、漏斗等。三、试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后,按四分法缩减至 100g,粉碎,籽粒全部通过100目筛,装入样品瓶备用。四、分析步骤4.1 样品提取称取50mg样品倒入10ml刻度离心管内加入4ml 80%乙醇,至于80℃水浴中不断搅拌40min ,离心,收集上清液,其残渣加2ml 80%乙醇重复提2次,合并上清液。80%乙醇定容至10ml,过滤后取滤液测定。4.2 制作标准曲线按照下表准备6支试管,进行编号加试剂:编号123456果糖标准液/ml00.10.20.30.40.580%乙醇/ml10.90.80.70.60.5HCl/ml111111间苯二酚/ml22222280℃水浴反应10min,冷却至室温,在480nm处测定OD值,以0浓度管调零。绘制成果糖质量浓度-OD 值曲线。4.3 显色测定取植物提取液代替标准果糖溶液,按上述步骤进行果糖含量的测定,读取 OD值,从标准曲线得到提取液总的果糖含量,然后再行计算样品中的果糖含量。五、结果计算果糖含量(%)=【(a×V总×n)/(V测×m×106)】×100%式中:a——由标曲计算所得还原糖含量,ug;V总——样品提取液总体积,ml;n——为样品提取液稀释倍数V测——显色测定时吸取样品液体积,ml;m——样品干重,g;106——ug换算成g 。
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发布时间: 2021 - 09 - 10
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氮是植物需要较多的必须元素之一,在土壤中呈交换性按状态存在的铵态氮,可以被植物直接吸收利用,是速效性氮素。目前,测定铵态氮的方法主要有靛酚蓝分光光度法、纳氏试剂比色法、滴定法、荧光法、电极法等。栢晖土壤铵态氮常用检测方法实验步骤:01:浸提称取适量土样,准确到0.01g,置于150mL三角瓶中,按一定固液比加入氯化钾溶液,塞紧塞子,在振荡机上振荡1h。取出静置,待土壤—氯化钾悬浊液澄清后,吸取一定量上层清液进行分析。02:比色吸取土壤浸出液2mL~10mL(含NH4+—N 2-25ug)放入50mL容量瓶中,用氯化钾溶液补充至10mL,然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL,摇匀。在20℃左右的室温下放置1h后(注1),加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物,然后用水定容至刻度。2h后,用1cm比色皿在625nm波长处(或红色滤光片)进行比色,读取吸光度。03:工作曲线分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL  NH4+—N标准液于50mL容量瓶中,各加10mL氯化钠溶液,同(2)步骤进行比色测定。其他土壤铵态氮检测方法靛酚蓝分光光度法2mol•L-1KCl溶液浸提土壤,把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液的颜色很稳定。在含氮0.05~0.5mol•L-1的范围内,吸光度与铵态氮含量成正比,可用比色法测定。纳氏试剂比色法用氧化镁的弱碱性蒸馏出土壤样品中铵态氮被盐酸溶液吸收,在碱性条件下与纳氏试剂络合生成黄色络合物,进行比色测定。讨论:对不同样品土壤中按态氮测量结果显示:氧化镁蒸馏法与扩散吸收法具有相同的准确度,但扩散吸收法检测时间较长,测定过程氧化镁易沿水膜上爬沾污内室,不好操作。蒸馏法很好的避免了扩散法的问题,操作简单,检测效率高,为土壤按态氮测定提供了一种蒸馏快速、结果准确可靠的检测方法。滴定法通过(氯化钠或氯化钾)浸提剂提取,经蒸馏滴定检测土壤中的铵态氮。大致步骤如下:称取新鲜土样10g于三角瓶中,分别加入一定浓度的氯化钠或氯化钾浸提剂50mL,在温度为25℃的水浴振荡器中震荡30min,使用滤纸干过滤后,吸取一定体积的浸出液于消煮管中,加入120g/L的氧化镁悬浊液10mL,经凯式定氮装置蒸馏,5mL浓度为20g/L的硼酸吸收后,用0.005moI/L的硫酸溶液反滴定馏出液。讨论:目前,我国土壤中铵态氮的检测没有统一的国家标准或行业标准,浸提方法多种多样,各种浸提方法之间存在着一定的误差,数据间无可比性,可以...
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