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2021
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09
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赤霉素的测定赤霉素(Gibberellins,GAs)作为植物体内广泛存在的一类生长调节剂，是高等植物体内的一类四环二萜羧酸化合物,参与调控植物种子萌发,下胚轴伸长,叶片伸展,花、果实及种子发育等诸多生理过程。截至1976 年就从植物中分离鉴定出32种赤霉素，至今,发现的赤霉素的种类己有百种之多。研究表明,赤霉素在植物抵抗非生物胁迫中也发挥着重要作用,主要通过调节GAs的生物合成、信号转导及其生物活性,以提高植物对非生物胁迫的耐受性。一、实验方法及原理本次实验通过提取样品中植物内源激素，再以安捷伦1290高效液相色谱仪串联AB公司Qtrap6500质谱仪，测定植物内源激素。1.试剂以下所有试剂如无特别注明，均为分析纯。实验用水为蒸馏水，去离子水或相当纯度的水。赤霉素(GA3)标准品、CNW C18 QuEChers填料、色谱级甲醇、乙腈、乙腈（样品提取液）。2．仪器设备（1）TG-16G台式高速离心机、电子天平、Agilent 1290高效液相色谱仪、SCIEX-6500Qtrap(MSMS)、气浴恒温摇床、超声清洗仪、水浴氮吹仪。3.标曲溶液配置（1）取甲醇溶液990 μl加入1.5 ml离心管，加入500 μg/ml每种激素标准品储备液各2 μl，震荡均匀，配置为终浓度1 μg/ml的使用母液以备后续使用。（2）取甲醇溶液999.9 μl、999.8 μl、999.5 μl、999 μl、998 μl、995 μl、980 μl分别加入1.5 ml离心管，而后取步骤（1）中配置的母液分别0.1 μl、0.2 μl、0.5 μl、1 μl、2 μl、5 μl、20 μl顺序加入上述甲醇溶液中，配置为终浓度0.1 ng/ml、0.2 ng/ml、0.5 ng/ml、1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、20 ng/ml的标曲溶液。4.流动相配置（1）有机相：取色谱纯甲醇900 ml加入1 L容量瓶，加入1 ml甲酸，以甲醇定容至1 L，颠倒混匀。（2）无机相：取超纯水900 ml加入1 L容量瓶，加入1 ml甲酸，以超纯定容至1 L，颠倒混匀。5.植物激素提取（1）准确称取样品约0.3-0.8 g，加入10倍体积乙腈溶液；（2）4℃提取过夜，12000 g离心5 min，取上清液；（3）沉淀再次加入5倍体积乙腈溶液，提取两次，合并所得上清液；（4）加入15-40 mg C18填料，剧烈震荡30 s，10000 g离心5 min，取上清液；（5）氮气吹干，以200 μl甲醇复溶，过0.22 μm有机相滤膜，放入-20℃冰箱待上机检测。（6）进样体积：2 ...