一.试剂
1.无乙醇氯仿：氯仿中含有少量乙醇做稳定剂，乙醇会影响氯仿在低压下沸腾。所以需要提纯。
提纯：在通风橱中，将氯仿（三氯甲烷）按1:2的体积比与蒸馏水一起加入分液漏斗中，充分摇动1min，慢慢放出下层氯仿于烧杯中，如此重复洗涤三次。得到无乙醇氯仿，加入适量无水氯化钙，去除氯仿中的水分。可重复使用。
2.0.5mol/L硫酸钾溶液：称取硫酸钾87.1g，溶于去离子水中，稀释至1000ml
3.1mol/L NaoH溶液：称取氢氧化钠（AR）4g，置于一大烧杯中，并立即倒出，然后加入不含CO2的蒸馏水约100mL，将溶液注入细口瓶中，塞紧橡皮塞，混匀，备用。
4.沸石
二．主要仪器
自动有机碳分析仪、真空干燥器、小烧杯（蒸发皿）、中速定量滤纸、漏斗、震荡仪、万分之一分析天平
三．试样的制备
取新鲜的实验室待测样品充分混匀后，按四分法缩减至 100g，粉碎，然后全部通过10目孔径筛，装入样品袋备用。
四. 分析步骤
4.1 试样溶液提取
4.1.1.称取试样5～10g（相当于干土10g，取部分样测含水量，确定称取土样重量）2份，分别放入25ml小烧杯（培养皿）中。将盛有一份土样的烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约放置烧杯2/3的量）的25ml烧杯，烧杯内放入少量沸石，同时放入盛有1mol/L NaOH溶液的小烧杯（吸收熏蒸过程中释放出来的CO2）。
4.1.2.盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿保持沸腾5min。关闭真空干燥阀门，于25度黑暗条件下培养24h。另一份样至于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。
4.1.3.熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应该听到空气进入的声音，否则熏蒸不完全，重做，取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5到6次，每次30分钟，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子），直到土壤无氯仿味道为止。
4.1.4.从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样，将土样转移到50ml聚乙烯离心管（塑料瓶）中，加入40ml 0.5mol/L 硫酸钾溶液（土水比1：4）800 r/min振荡30分钟，用中速定量滤纸过滤。土壤提取液最好立刻分析，或--20℃冷冻保存，使用前需解冻摇匀。
4.2 空白溶液制备
取10ml硫酸钾溶液作为空白。
4.3 试样测定
吸取上述土壤提取液10ml（若浓度过高则稀释）注入自动总有机碳（TOC）分析仪上，测定提取液有机碳、N含量。（仪器使用方法待定）
五．结果计算
土壤微生物生物量碳： Bc=Ec/Kec
Ec为熏蒸与未熏蒸土壤的差值；
Kec为转换系数，取值为0.45
土壤微生物生物量氮： Bc=EN/Ken
EN为熏蒸与未熏蒸土壤的差值；
Ken为转换系数，取值为0.25
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