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土壤中有机氮组分的测定

日期: 2022-05-05
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今天给大家分享一下如何用酸水解-蒸馏法测定土壤中有机氮组分(氨基酸态氮、氨基糖态氮、酸解铵态氮、酸解总氮)。操作步骤如下:·

1)土壤水解液的制备:

称取适量过0.25mm筛的土壤样品,放入具有磨口接头的三角瓶中,加入2滴正辛醇和20ml和6ml的HCI,摇动瓶子使土壤和酸液充分混匀,将瓶子放入有温控功能的远红外消煮炉中,在瓶口装上有玻璃磨口接头的冷凝管,接通冷凝水,打开电源开关,使温度控制在120±3℃,在回流条件下使土壤--酸混合液慢慢沸腾12小时。

水解结束后,用中速蓝带滤纸将样品趁热过滤,滤液收集在100ml的烧杯中,用去离子水少量多次冲洗残渣,使滤液体积达到约6Oml。将盛有滤液的烧杯放在碎冰块中,借助PH计,逐滴慢慢加入5mol/L NaOH溶液,边加边搅拌,直到水解液的pH达5左右,再用

0.5mol/L的NaOH进行中和,使水解液的pH达6.5±0.1,用小漏斗把酸解液转移到I00ml容量瓶中,定容至刻度。

土壤中有机氮组分的测定

2)酸解液中氮素形态的测定

(1)酸解液全氮的测定:

取样前,先倒转容量瓶几次,使悬浮液均匀,并用末端较宽的移液管吸取5ml酸解液,放入消煮管中,加入0.5克定氮混合催化剂和2ml浓硫酸,380℃温度下消煮1.5小时。冷却后将消煮管连接到定氮仪上,加10ml 10mol/L NaOH,蒸馏约4分钟,流出液用硼酸吸收,蒸馏结束后用0.0055 mol/L H2SO4滴定。

(2)铵态氮的测定

取10ml已中和的酸水解液,放入消煮管中,加入2mL 3.5%的MgO悬浮液,立即连接蒸馏装置,蒸馏约2分钟后滴定。

(3)氨基糖态氮的测定

取已中和的酸水解液10ml于消煮管中,加入10ml磷酸一硼酸缓冲液(PH11.2),连接蒸馏装置,蒸馏4分钟,滴定。此测定结果减去铵态氮,即为氨基糖态氮。

(4)氨基酸态氮的测定

取5ml已中和的酸水解液于消煮管中,加入1ml 0.5mol/L NaOH溶液,在沸水中加热直到溶液减至2-3ml,取出冷却,加入0.5g柠檬酸和0.1g茚三酮,将消煮管放回沸水浴中,加热1分钟后,旋转消煮管(不放开水浴)3分钟,再在水浴中保持9分钟,取出冷却后,加入10ml磷酸--硼酸缓冲液和1ml 5mol/L NaOH,蒸馏4分钟,滴定。

(5)未知态氮= 水解总氮- (铵态氮+氨基糖态氮+氨基酸态氮)

(6)水解氮= 土壤总氮-水解液总氮


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    土壤中隐藏着一种特殊的"身份证"——氨基糖,它能准确告诉我们土壤中微生物的活动痕迹。栢晖作为一家专业检测团队,我们每天都要处理几十份土壤样品,很多科研工作者对氨基糖检测有一些疑问。今天我们就一起看看吧~为什么氨基糖检测如此重要?土壤氨基糖是一类含有氨基和羟基的糖类化合物,主要来源于微生物细胞壁的残留物。它们就像微生物在土壤中留下的"指纹",具有三大独特价值:稳定性高:能在土壤中长期保存,不易降解来源明确:不同氨基糖代表不同微生物来源(如真菌/细菌)指示性强:通过各组分的比值能反映微生物群落变化常见的四种氨基糖各司其职:氨基葡萄糖:主要来自真菌氨基半乳糖:细菌和部分真菌来源胞壁酸:细菌特有标志物氨基甘露糖:辅助判断微生物群落结构解密GC-MS检测全流程在栢晖实验室,我们采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)进行氨基糖检测,整个过程犹如一场精密的"分子侦探"行动:第一步:酸水解破壁称取0.5-1.0g土样,加入6mol/L盐酸,在105℃烘箱中水解8小时。这个步骤就像打开微生物的"保险箱",将结合态的氨基糖释放出来。第二步:多重净化除杂通过旋蒸、pH调节、离心等步骤去除干扰物。特别是采用甲醇溶解和氮吹浓缩,确保目标物质纯度。这个阶段堪称实验成败的关键,我们的技术员需要像"分子厨师"一样精准把控每个参数。第三步:衍生化处理加入衍生试剂后,在80℃水浴中进行两步衍生反应。这一步让氨基糖"穿上检测外衣",变得容易被仪器识别。实验记录显示,衍生时间相差5分钟就可能导致10%以上的结果偏差。第四步:GC-MS分析将处理好的样品注入气相色谱-质谱联用仪,通过保留时间和特征离子进行定性与定量分析。我们的仪器可以检测到ppb级别的氨基糖含量,灵敏度堪比"分子显微镜...
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    土壤氨基糖是指一类含有氨基和羟基的糖类化合物,主要来源于微生物细胞壁的残留以及微生物代谢产物。它们是土壤有机质的重要组成部分,具有较高的稳定性和微生物异源性,在土壤中能够长期保存。土壤氨基糖不仅是评估微生物对土壤有机碳、氮贡献的重要指标,还能通过不同组分的比值反映微生物群落组成的变化。常见的土壤氨基糖包括氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖和胞壁酸等,它们在土壤生态系统的物质循环和结构稳定中发挥着关键作用。土壤氨基糖来源:微生物合成:大部分来源于微生物残体(真菌/细菌生物量)植物输入:少量来自植物根系分泌物有机质转化:腐殖质结合态氨基糖(与铁铝氧化物共沉淀)实验方法气相色串联质谱01称取约0.5~1.0g的土样于水解管中,沿管壁加入5 mL 6 mol/L盐酸,用氮气置换水解管中空气2min后密封。在烘箱中105℃放置8h水解。02待水解液冷却至室温后,加入250μg肌醇。涡旋仪震荡30s混匀。取水解液于5mL离心管中,于8000rpm离心1min。取上清液1mL于50mL离心管中用氮气于吹干。用20mL纯水溶解残渣。用0.4mol/LKOH 0.01mol/LHCL调节pH至6.6~6.8。离心管以4000rpm离心10min,转移出上清液于100mL茄型瓶中,于65℃,25rpm旋转蒸发至干。再加入10mL无水甲醇溶解瓶中残渣。后转移至另一50mL离心管。氮吹至5mL左右,涡旋溶解管壁有机物后,以4000rpm离心10min,除盐。再将上清液转移到5mL衍生瓶中吹干。并加入100μg戊五醇1mL水,冻干。03 标准样品制备:同时准备3个标准样品。另取衍生瓶中加入100μL混标(1mg/mL的氨基葡萄糖、氨基半乳糖、0.5mg/mL氨基甘露糖,0.25mg/mL胞壁酸),50μg肌醇,100μg戊五醇,轻轻摇匀后,与样品衍生瓶一起冻干。04衍生:a) 向吹干的样品...
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案例名称: 孵化中心
说明: 栢晖生物科技有限公司项目孵化中心成立于2015.06.01日,研发领域涉及生物试剂耗材、仪器、新产品开发及各生物科技服务类项目等。自成立以来,陆续吸引了大批专家教授加盟合作,并与全国数十家高校及知名企业建立了良好的合作关系。中心共有博士及以上学位骨干人员10人,专门负责公司新产品研发等工作,已成功研发出无线温度监控器及NO检测试剂盒等产品(详情见成功案例),另有细胞分选仪等三个项目正在积极孵化当中。
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案例名称: 孵化中心流程
说明:
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