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植物叶绿素、类胡萝卜素的测定方法

日期: 2022-04-26
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一、 实验原理和目的     

根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比 。 叶绿素和类胡萝卜素在95%的乙醇提取液中的最大吸收峰波长不同, 叶绿素(95%乙醇)在665nm、649nm,类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰,根据在分光光度计下测定的吸光度,求得叶绿素及类胡萝卜素的含量。

二、 实验器具和步骤  

实验器具:分光光度计(UV-1800PC,上海美普达仪器有限公司)、电子天平(ES-J220,天津市德安特传感技术有限公司)、研钵、 试管、小漏斗、滤纸、吸水纸、 移液管、量筒、剪刀  ;

试剂: 95%乙醇(或80%丙酮)、石英砂、碳酸钙粉; 

步骤:

1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右,放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙粉及3~5ml 95%乙醇,研成均浆,继续研磨至组织变白,静置3~5min 。

2. 取滤纸1张,置漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,过滤到10ml试管中,用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。 

3.用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ,摇匀。

4.把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95%乙醇为空白,在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度 

计算公式:

植物叶绿素、类胡萝卜素的测定方法

 Ca=13.95A665-6.88A649; 

Cb=24.96A649-7.32A665   

植物叶绿素、类胡萝卜素的测定方法

Cx=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245

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