今天，栢晖生物给大家整理了如何通过比色法测定植物中有效磷的含量，具体流程如下：
一、试剂
所有试剂除注明者外，均为分析纯。
1.1 10%(w/v)的HClO4：取7.874ml 72% 的HClO4定容至100ml。
1.2 5%(w/v)的HClO4：取 39.3676ml 72%的HClO4定容至1L。
1.3 硫酸-钼酸铵溶液（溶液A）
1）溶解1.0g钼酸铵（NH4）6MO7O24·4H2O于约100ml水中；
2）然后徐徐加入6.25ml浓H2SO4（98%）；
3）充分混匀，冷却后定容至250ml。
1.4 10%（w/v）抗坏血酸（VC）溶液（溶液B）：溶解10g抗坏血酸于水中，溶解后定容至100ml，储存于棕色瓶中，4℃保存。
1.5 工作液：按体积比6:1混合溶液A和溶液B
注：工作液需要每天配置，现配现用，配好后放置2小时后再使用。
1.6 磷标准溶液的配制（60ppm ）:准确称取0.230g磷酸二氢铵（NH4H2PO4）于水中，并定容至100ml，即得600ppm的磷标液。将600ppm的磷标液用提取剂【1:9（10% HClO4：5% HClO4）】稀释10倍，得60ppm的磷标准溶液。
二、主要仪器
万分之一分析天平、紫外可见分光光度计、恒温振荡机或往返式振荡机、酸度计
三、试样的制备
取新鲜样本剪碎充分混匀后，装入样本瓶放在4℃备用。
四、分析步骤
4.1 称取0.5g鲜样称重m，用液氮研磨成粉末。待研钵温度上升后，加入1ml 10%HClO4研磨混匀。
4.2 在研钵中分两次加入4.5mL的5%高氯酸，共计9ml。第一次加入4.5mL 5%高氯酸到研钵中后，将匀浆液转移到新的10ml离心管中；第二次再加入4.5mL 5%高氯酸到研钵中后，尽量洗净研钵中的样品，再将液体继续转移到第一次的10ml离心管中。
4.3 在冰上放置30min，每隔5min上下颠倒混匀几次。则样品制备溶液为10ml(V=1ml+9ml=10ml=0.01L) 于4℃，10000g离心10min，取5ml上清液至新的离心管中，用于有效磷的测定（钼蓝法）。 4.4 取1ml(V1)上清液，在上清液中加入2ml的工作液，则反应液为3ml(V2=上清液+工作液)，反应液于40℃温育20min。
4.5 反应液在室温冷却后，观察蓝色深浅，对蓝色过深的样品可适当稀释，地上部一般要稀释5倍。每个样品吸取200ul到酶标板中，于820nm可见光波下用酶标仪测定吸收值。
4.6 标准曲线的绘制：将60ppm的磷标液用提取剂稀释，形成稀释标液。再与工作液反应，生成如下系列标准反应液溶液。用提取剂与工作液的反应液做空白。
提取剂-V提 1ml 990ul 950ul 920ul 900ul 850ul 820ul 800ul
标液-V标 0 10ul 50ul 80ul 100ul 150ul 180ul 200ul
工作液-V工 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml 2ml
浓度-y ppm 0 0.2 1.0 1.8 2.0 3.0 3.6 4.0
于40℃温育20min后于820nm可见光波下用酶标仪测定吸收值，绘制标准曲线
五、结果计算
植物有效磷含量（mg/g）=C×（V2/V1）×V/M×N
式中：
C--为从校准曲线或回归方程求得的测定液有效磷的质量浓度,mg/L；
V--为提取液体积，ml；
M--为称取试样质量，g；
V1--为上清液体积，ml；
V2--为反应液总体积，ml；
N--为稀释倍数。