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土壤酶活性,是指土壤酶催化物质转化的能力。常以单位时间内单位土壤的催化反应产物量或底物剩余量表示。土壤酶活性既包括已积累于土壤中的酶活性,也包括正在增殖的微生物向土壤释放的酶活性,它主要来源于土壤中的微生物,动物和植物。土壤酶活的分类:已知的酶根据酶促反应的类型可分为六大类。即水解酶、氧化还原酶、转移酶、裂合酶、异构酶和连接酶。1. 水解酶类: 酶促各种化合物中分子键的水解和裂解反应。主要包括蔗糖酶、淀粉酶、纤维素酶、脲酶、蛋白酶、磷酸酶等。2.氧化还原酶类: 指催化两分子间发生氧化还原作用的酶的总称。主要包括脱氢酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、硝酸还原酶、亚硝酸还原酶等。3.转移酶类: 指能够催化除氢以外的各种化学官能团从一种底物转移到另一种底物的酶类,包括转氨酶、果聚糖蔗糖酶、转糖苷酶等。4.裂合酶类: 指催化由底物除去某个基团而残留双键的反应、或通过逆反应将某个基团加到双键上去的反应的酶的总称,主要包括谷氨酸脱羧酶、天门冬氨酸脱羧酶等。5.异构酶类: 酶促有机化合物转化成它的异构体的反应。6.连接酶类: 是一种催化两种大型分子以一种新的化学键结合一起的酶。测定方法分析:1.生化培养法作为酶活测定的重要方法之一,其又细分为分光光度法和滴定法。分光光度法:其基本原理是酶与底物混合经培养后产生某种带颜色的生成物,可在某一吸收波...
发布时间: 2024 - 11 - 21
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发布时间: 2021 - 11 - 16
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今天,栢晖生物给大家整理了如何通过比色法测定植物中有效磷的含量,具体流程如下:一、试剂所有试剂除注明者外,均为分析纯。1.1 10%(w/v)的HClO4:取7.874ml 72% 的HClO4定容至100ml。1.2 5%(w/v)的HClO4:取 39.3676ml 72%的HClO4定容至1L。1.3 硫酸-钼酸铵溶液(溶液A)1)溶解1.0g钼酸铵(NH4)6MO7O24·4H2O于约100ml水中; 2)然后徐徐加入6.25ml浓H2SO4(98%); 3)充分混匀,冷却后定容至250ml。  1.4 10%(w/v)抗坏血酸(VC)溶液(溶液B):溶解10g抗坏血酸于水中,溶解后定容至100ml,储存于棕色瓶中,4℃保存。  1.5 工作液:按体积比6:1混合溶液A和溶液B注:工作液需要每天配置,现配现用,配好后放置2小时后再使用。1.6 磷标准溶液的配制(60ppm ):准确称取0.230g磷酸二氢铵(NH4H2PO4)于水中,并定容至100ml,即得600ppm的磷标液。将600ppm的磷标液用提取剂【1:9(10% HClO4:5% HClO4)】稀释10倍,得60ppm的磷标准溶液。二、主要仪器万分之一分析天平、紫外可见分光光度计、恒温振荡机或往返式振荡机、酸度计 三、试样的制备取新鲜样本剪碎充分混匀后,装入样本瓶放在4℃备用。四、分析步骤4.1 称取0.5g鲜样称重m,用液氮研磨成粉末。待研钵温度上升后,加入1ml 10%HClO4研磨混匀。 4.2 在研钵中分两次加入4.5mL的5%高氯酸,共计9ml。第一次加入4.5mL 5%高氯酸到研钵中后,将匀浆液转移到新的10ml离心管中;第二次再加入4.5mL 5%高氯酸到研钵中后,尽量洗净研钵中的样品,再将液体继续转移到第一次的10ml离心管中。4.3 在冰上放置30min,每隔5min上下颠倒混匀几次。则样品制备溶液为10ml(V=1ml+9ml=10ml=0.01L)  于4℃,10000g离心10min,取5ml上清液至新的离心管中,用于有效磷的测定(钼蓝法)。 4.4 取1ml(V1)上清液,在上清液中加入2ml的工作液,则反应液为3ml(V2=上清液+工作液),反应液于40℃温育20min。 4.5 反应液在室温冷却后,观察蓝色深浅,对蓝色过深的样品可适当稀释,地上部一般要稀释5倍。每个样品吸取200ul到酶标板中,于820nm可见光波下用酶标仪测定吸收值。4.6 标准曲线的绘制:将60ppm的磷标液用提取剂稀释,形成稀释标液。再与工作液反应,生成如下系列标准反应液溶液。用...
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发布时间: 2021 - 11 - 12
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深秋时分,银杏叶四处飘散的景象令人着迷,踏上去如行走在棉花糖上...据相关资料显示,银杏叶为银杏科植物银杏Ginkgo biloba L .的干燥叶。其主要含黄酮类(flavonoids)和萜烯内酯(terpene)类化合物。据医学药理研究证实,银杏叶黄酮具有抗炎症、抗环腺苷酸乙酯酶活性、抗组胺活性等多种效用。今天,栢晖生物就给大家梳理一下如何通过比色法测定植物中黄酮的含量。一、试剂所有试剂除注明者外,均为分析纯。1.1 芦丁对照品、80%乙醇、30%乙醇、1.2 0.05g/ml NaNO2:称取1.7225g亚硝酸钠定容到500ml。1.3 0.1g/ml Al(NO3)3:称取18.7565g硝酸铝定容到500ml。1.4 0.04g/ml NaOH溶液:称取0.8g氢氧化钠定容到500ml。二、主要仪器万分之一分析天平、紫外可见分光光度计三、试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后,粉碎,籽粒全部通过 0.25mm(秸秆通过 0.5mm)孔径筛,装入样品瓶备用。四、分析步骤4.1 试样溶液制备取待测样品,研细,精密称取约0.3g,用80%乙醇回流提取2次(每次用30ml)过滤,滤液合并后蒸干,用30%乙醇溶解并定容至10ml。4.2 标准曲线绘制标准工作曲线的绘制:精密量取芦丁对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml到10ml容量瓶中,各加入30%乙醇至1.0ml,加入0.5ml 0.05g/ml NaNO2溶液,放置6min后再加入0.3ml0.1g/ml Al(NO3)3溶液,摇匀,放置6min后加入3ml 0.04g/ml NaOH溶液,用水定容至标线,摇匀,放置15min,在510nm处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,芦丁对照品溶液的浓度为横坐标,绘制标准工作曲线。4.3 样品的测定精密量取样品溶液1.0ml,置于10ml容量瓶中,按照标准工作曲线绘制的方法,自加入0.5ml 0.05g/ml NaNO2溶液起依次测定吸光度,从标准工作曲线上查得样品溶液中芦丁的浓度,作为总黄酮的浓度,再计算求得总黄酮的含量。五、结果计算式中:C——从标准曲线查得黄酮的含量,μg/g;N——稀释倍数;Vt——提取液总体积,ml;Vs——测定取液量,ml;0.001——将μg换算为mg;m——样品称重量。所得结果应保留小数点后三位
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发布时间: 2021 - 11 - 01
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土壤中氮的来源一般有以下几方面:施入土壤中的化学氮肥和有机肥料、动植物残体的归还、生物固氮、雷电降雨带来的等等,目前,施入土壤中的肥料是土壤氮的主要来源。今天栢晖生物给大家整理了如何通过碱解扩散法测定土壤水解性氮一、试剂(1)1.0mol/L氢氧化钠溶液:称取化学纯氢氧化钠40 g,用蒸馏水溶解后冷却定容到1000 ml。(2)1.2mol/L氢氧化钠溶液:称取化学纯氢氧化钠48 g,用蒸馏水溶解定容到1000 ml。(3)1.8mol/L氢氧化钠溶液:称取化学纯氢氧化钠72 g,用蒸馏水溶解后冷却定容到1000 ml。 (4)2%硼酸溶液:称取20 g硼酸,用热蒸馏水(约60℃)溶解,冷却后稀释至1000ml,用稀盐酸或稀氢氧化钠调节pH至4.5(定氮混合指示剂显葡萄酒红色)。 (5)0.005mol/L(1/2 H2SO4)硫酸标准溶液:量取H2SO4 2.83 mL,加蒸馏水稀释至5000 mL,然后用标准碱或硼酸标定之,此为0.0200mol/L(1/2 H2SO4)标准溶液,再将此标准溶液准确的稀释4倍,即得0.0050mol/L(1/2 H2SO4)的标准液。(6)定氮混合指示剂:0.5g溴甲酚绿和0.1g甲基红溶于100ml乙醇中。 (7)特制胶水:阿拉伯胶(称取40g粉状阿拉伯胶,溶于50 ml蒸馏水中)在烧杯中热温至70—80℃,搅拌促溶,约1小时后放冷。加入甘油20 mL,饱和碳酸钾水溶液20 mL,搅拌、放冷。离心去除泡沫和不溶物,清液贮于具塞玻璃瓶中备用。(最好放置在盛有浓硫酸的干燥器中以除去氨) (8)硫酸亚铁(粉状) :将分析纯硫酸亚铁磨细保存于阴凉干燥处。二、主要仪器 扩散皿、微量滴定管、1/1000分析天平、恒温箱、玻璃棒、毛玻璃、皮筋、吸管(2 ml和10 ml),腊光纸、角匙、瓷盘。三、试样的制备 称取通过18号筛(孔径1 mm)风干样品2.000 g(精确到0.001g)和1 g硫酸亚铁粉剂,均匀铺在扩散皿外室内,水平地轻轻旋转扩散皿,使样品铺平。(水稻土样品则不必加硫酸亚铁。) 四、分析步骤1. 用吸管吸取2%硼酸溶液2 ml,加入扩散皿内室,并滴加1滴定氮混合指示剂,然后在皿的外室边缘涂上特制胶水,盖上毛玻璃,并旋转数次,以便毛玻璃与皿边完全粘合,再慢慢转开毛玻璃的一边,使扩散皿露出一条狭缝,迅速用移液管加入10 ml 1.8 mol/L氢氧化钠于皿的外室(水稻土样品则加入10 ml 1.2 mol/L氢氧化钠),立即用毛玻璃盖严。2. 水平...
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发布时间: 2021 - 10 - 29
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可溶性蛋白指可以以小分子状态溶于水或其他溶剂的蛋白。通常在植物生理、微生物、食品加工等实验中作为重要指标。如可溶性蛋白是植物抗旱性的重要指标之一。今天栢晖生物就给大家分享一下如何通过考马斯亮蓝染色法测定植物中的可溶性蛋白:“1试剂所有试剂除注明者外,均为分析纯。1.1 考马斯亮蓝溶液配制:称取100 mg考马斯亮蓝,溶于50ml 90%乙醇中,加入100ml 85%(W/V)磷酸,再用蒸馏水定容到1L。在过夜后过滤并贮于棕色瓶中,常温下可保存一个月。1.2 90% 乙醇1.3 100 g/ml 牛血清蛋白(BSA)标准溶液:称取10mg BSA定容至100 ml即为100 g/ml。或称取25 mg BSA加蒸馏水水溶解后定容至100 ml,再从中吸取40 ml蒸馏水定容至100ml。1.4 0.05 mol/LpH7.8磷酸配制:A母液,0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液:取Na2HPO4·12H2O (分子量358.14)35.85 g,用蒸馏水定容至500 ml。B母液,0.2 mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O (分子量156.01)1.5601 g,用蒸馏水定容到50 ml。1.5 0.05M pH7.8磷酸:分别取A母液228.75ml,B母液21.25ml,用蒸馏水定容至1000ml。“2主要仪器万分之一分析天平、紫外可见分光光度计、离心机“3试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后,籽粒全部通过 0.25mm(秸秆通过 0.5mm)孔径筛,装入样品瓶备用。“4分析步骤4.1 试样溶液制备样品提取:取鲜样0.2—0.5g,用蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后,3000r/min—4000r/min离心10min,上清液备用。4.2 标准曲线绘制取6支具塞试管,依次加入标液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml,然后用蒸馏水补充至1ml,再向各管中加入5ml考马斯亮蓝试剂,5min左右,以0号试管为空白对照,在595nm下比色测定吸光度,以蛋白质含量为横坐标,以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。4.3 样品的测定吸取样品提取液1.0ml(视蛋白质含量适当稀释),放入试管中(每个样品重复两次),加入5ml考马斯亮蓝试剂,摇匀,放置2min待反应完成,在595nm下比色,测定吸光度,并通过标准曲线查蛋白质含量。“5结果计算式中:C—查标准曲线值,g;Vt—提取液总体积,ml;WF—样品鲜重,g;Vs—测定时加样量,ml所得结果应保留小数点后三位
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发布时间: 2021 - 10 - 08
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植物体经灼烧后其中的水分被全部除去,干物质被炭化分解,蕞后的残留物称为“粗灰分”。植物干物质中粗灰分的含量,随植物种类、品种、不同器官和部位、生育期以及生长环境和其他农业技术措施等因素而变动,但一般为2~7%,平均约5%。测定粗灰分的含量,可以了解各种植物在不同生育期和不同器官中养分吸收和累积状况以及土壤、施肥、气候、栽培管理等因素对植物灰分含量变化的影响。并且也是农产品及其加工产品的品质检定项目之一。今天栢晖生物给大家整理了如何通过灼烧法测定植物粗灰分:一、方法概要        称量一定质量的试样,在550℃~600℃高温下灼烧。是有机化合物分解挥发,矿物成分转化为氧化物或碳酸盐,统称粗灰分,用重量法测定。 二、主要仪器万分之一天平、瓷坩埚、干燥剂、马弗炉三、试样的制备取风干的实验室待测样品充分混匀后,按四分法缩减至 100g,粉碎,籽粒全部通过 0.25mm(秸秆通过 0.5mm)孔径筛,装入样品瓶备用。四、操作步骤      将坩埚放入马弗炉中,于550℃下灼烧30min,待炉降温至200℃后,将坩埚移入干燥器中,冷却至室温后称量(M0)4.2 称取5.0g试样于已恒重的坩埚中称重(M1)4.3 将其移入预先加热到550℃的马弗炉中灼烧3h,直至试样完全灰化,无黑色炭粒,断电,立即取出坩埚,室温冷却2~3min,干燥器内平衡30min,称重(M2)五、结果计算      粗灰分(g·kg-1) = (M2-M0)/(M1-M0)×1000式中:      粗灰分—植物粗灰分            M0--瓷坩埚质量,g ;           M1--瓷坩埚加试样重量,g ;           M2--瓷坩埚加粗灰分质量,g;1000--换算因数。
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