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土壤酶活性,是指土壤酶催化物质转化的能力。常以单位时间内单位土壤的催化反应产物量或底物剩余量表示。土壤酶活性既包括已积累于土壤中的酶活性,也包括正在增殖的微生物向土壤释放的酶活性,它主要来源于土壤中的微生物,动物和植物。土壤酶活的分类:已知的酶根据酶促反应的类型可分为六大类。即水解酶、氧化还原酶、转移酶、裂合酶、异构酶和连接酶。1. 水解酶类: 酶促各种化合物中分子键的水解和裂解反应。主要包括蔗糖酶、淀粉酶、纤维素酶、脲酶、蛋白酶、磷酸酶等。2.氧化还原酶类: 指催化两分子间发生氧化还原作用的酶的总称。主要包括脱氢酶、过氧化氢酶、过氧化物酶、硝酸还原酶、亚硝酸还原酶等。3.转移酶类: 指能够催化除氢以外的各种化学官能团从一种底物转移到另一种底物的酶类,包括转氨酶、果聚糖蔗糖酶、转糖苷酶等。4.裂合酶类: 指催化由底物除去某个基团而残留双键的反应、或通过逆反应将某个基团加到双键上去的反应的酶的总称,主要包括谷氨酸脱羧酶、天门冬氨酸脱羧酶等。5.异构酶类: 酶促有机化合物转化成它的异构体的反应。6.连接酶类: 是一种催化两种大型分子以一种新的化学键结合一起的酶。测定方法分析:1.生化培养法作为酶活测定的重要方法之一,其又细分为分光光度法和滴定法。分光光度法:其基本原理是酶与底物混合经培养后产生某种带颜色的生成物,可在某一吸收波...
发布时间: 2024 - 11 - 21
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发布时间: 2022 - 06 - 15
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脱氢酶是一类氧化还原酶,它的作用是催化氢从被氧化的物体(基质AH)中转移到另一个物体(受氢体B)上:AH+B⇄A+BH已知受氢体可以接受脱氢酶脱出的氢原子,根据接受氢原子的量可以判断脱氢酶的活性。无色的氯化三苯基四氮唑(TTC,俗称红四唑)接受氢后变成红色的三苯基甲瓒(TF),根据产生红色的色度进行比色定量分析,就可以判断脱氢酶的活性。一、主要仪器和试剂分光光度计(UV-1800PC,上海美普达仪器有限公司)电子分析天平(JJ124BC,常州市双杰测试仪器厂)离心机(KH20A,湖南凯达科学仪器有限公司)水浴锅(HH-6孔,祥达仪器)0.36%Na2SO3 溶液:称取0.3657g亚硫酸钠溶于100ml蒸馏水中;0.05M Tris-HCl缓冲液(PH=7.6):称取三羟甲基氨基甲烷,加1.0MHCl 20毫升,蒸馏水定容至1L;0.4%TTC(氯化三苯基四氮唑):称取0.4克TTC溶于100毫升蒸馏水中,每周新配;Na2S2O4,甲醛,丙酮(分析纯)二、操作步骤1. 标准曲线的绘制(1)按下表配置系列浓度的TTC标准溶液。(2)显色用药匙向每只比色管中各加入少许连二亚硫酸钠(Na2S2O4),混匀,使TTC全部还原为红色的TF。用1~5ml移液枪向各管滴加1ml甲醛终止反应,摇匀后再加入2ml丙酮震荡摇匀,37℃水浴10min。(3)测定吸光度,绘制标准曲线。在485nm波长下测定各管溶液的吸光度A,并以A为纵坐标,TTC浓度为横坐标,绘制出TTC标准曲线。2.壤脱氢酶活性的测定(1)培养并显色首先,按下表向四支离心管中分别加入以下物质然后将以上四支离心管避光,37℃保温培养24h。(2)培养结束后,用1~5ml可调试移液枪向各管分别加入1ml甲醛终止反应;再分别加入2ml丙酮震荡并于37℃下水浴保温10min。(3)离心;将各离心管置于离心机中,4000r/min离心5min。(4)测吸光度;取上清液在485nm波长下测定吸光度A,在标准曲线上查出相应的TTC浓度。3.土壤脱氢酶活性的计算脱氢酶活性(ug/g土/24h)=A×B×C式中:A为标准曲线中查的TTC浓度(μg/ml);B为培养时间的校正值(h);C为比色时的稀释倍数.
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发布时间: 2022 - 05 - 05
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今天给大家分享一下如何用酸水解-蒸馏法测定土壤中有机氮组分(氨基酸态氮、氨基糖态氮、酸解铵态氮、酸解总氮)。操作步骤如下:·1)土壤水解液的制备:称取适量过0.25mm筛的土壤样品,放入具有磨口接头的三角瓶中,加入2滴正辛醇和20ml和6ml的HCI,摇动瓶子使土壤和酸液充分混匀,将瓶子放入有温控功能的远红外消煮炉中,在瓶口装上有玻璃磨口接头的冷凝管,接通冷凝水,打开电源开关,使温度控制在120±3℃,在回流条件下使土壤--酸混合液慢慢沸腾12小时。水解结束后,用中速蓝带滤纸将样品趁热过滤,滤液收集在100ml的烧杯中,用去离子水少量多次冲洗残渣,使滤液体积达到约6Oml。将盛有滤液的烧杯放在碎冰块中,借助PH计,逐滴慢慢加入5mol/L NaOH溶液,边加边搅拌,直到水解液的pH达5左右,再用0.5mol/L的NaOH进行中和,使水解液的pH达6.5±0.1,用小漏斗把酸解液转移到I00ml容量瓶中,定容至刻度。2)酸解液中氮素形态的测定(1)酸解液全氮的测定:取样前,先倒转容量瓶几次,使悬浮液均匀,并用末端较宽的移液管吸取5ml酸解液,放入消煮管中,加入0.5克定氮混合催化剂和2ml浓硫酸,380℃温度下消煮1.5小时。冷却后将消煮管连接到定氮仪上,加10ml 10mol/L NaOH,蒸馏约4分钟,流出液用硼酸吸收,蒸馏结束后用0.0055 mol/L H2SO4滴定。(2)铵态氮的测定取10ml已中和的酸水解液,放入消煮管中,加入2mL 3.5%的MgO悬浮液,立即连接蒸馏装置,蒸馏约2分钟后滴定。(3)氨基糖态氮的测定取已中和的酸水解液10ml于消煮管中,加入10ml磷酸一硼酸缓冲液(PH11.2),连接蒸馏装置,蒸馏4分钟,滴定。此测定结果减去铵态氮,即为氨基糖态氮。(4)氨基酸态氮的测定取5ml已中和的酸水解液于消煮管中,加入1ml 0.5mol/L NaOH溶液,在沸水中加热直到溶液减至2-3ml,取出冷却,加入0.5g柠檬酸和0.1g茚三酮,将消煮管放回沸水浴中,加热1分钟后,旋转消煮管(不放开水浴)3分钟,再在水浴中保持9分钟,取出冷却后,加入10ml磷酸--硼酸缓冲液和1ml 5mol/L NaOH,蒸馏4分钟,滴定。(5)未知态氮= 水解总氮- (铵态氮+氨基糖态氮+氨基酸态氮)(6)非水解氮= 土壤总氮-水解液总氮
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发布时间: 2022 - 04 - 27
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方法原理:第一步在待测液中加入酚酞指示剂,用标准酸滴定至溶液由红色变为无色(PH8.3),此时CO32-只被中和为HCO3-;第二步加入甲基橙指示剂,继续用标准酸滴定至溶液由黄色变为橙红色(PH3.8),此时溶液中原有的HCO3-和第一步由CO32-生成的HCO3-全被中和为CO32-。由标准酸的两次用量可分别求得土壤中CO32-和HCO3-的含量。仪器及试剂:往复式电动振荡机;漏斗;广口瓶,500ml;具塞三角瓶,500ml去除二氧化碳的水:将蒸馏水煮沸15min,冷却后立即使用;硫酸标准溶液:吸取28mL浓硫酸(p=1.84)加入1L去二氧化碳水中,此溶液浓度约为0.lmol/L硫酸标准溶液。将此溶液用碳酸钠标定后,准确稀释5倍,即为c(1/2H2S04)=0.02mol/L的硫酸标准溶液;0.5%(m/v)酚酞指示剂:称取0.5g酚酞溶于100ml50%(v/v)乙醇溶液.0.1%(m/v)甲基橙指示剂:称取0.1g甲基橙溶于100mL水中.分析步骤:(1)称取过2mm孔径筛的风干试样50g(精确至0.01g),置于500mL广口瓶(矿泉水瓶)中,加250mL去除CO2的水,用橡皮塞塞紧瓶口,在振荡机上振荡3min,立即过滤,开始滤出的10mL滤液弃去,以获得清亮的滤液,加塞备用。电导、CO32-、HCO3-等项测定应立即进行,其他离子的测定亦应在当天完成。(2)吸取试样待测液25.00mL放入150mL三角瓶中,加入酚酞指示剂2滴,如待测液不显红色,表示没有CO32-存在,如溶液显红色,用硫酸标准溶液滴定至红色刚消失为止,记录所用硫酸标准溶液的体积(V1)。在滴定过的溶液中加入甲基橙指示剂2滴,用硫酸标准溶液滴定至由黄色转变成明显的橙红色为止。记录加甲基橙后滴定所用硫酸标准溶液的体积(V2)。结果计算:CO32-(g/kg)=2V1×C×D×1000/m×0.030HCO3-(g/kg)=(V2-V1)×C×D×1000/m×0.061C--硫酸标准溶液浓度;D--分取倍数,250/25;M--称取试样质量,g
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发布时间: 2022 - 04 - 26
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一、 实验原理和目的     根据朗伯—比尔定律,某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比 。 叶绿素和类胡萝卜素在95%的乙醇提取液中的最大吸收峰波长不同, 叶绿素(95%乙醇)在665nm、649nm,类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰,根据在分光光度计下测定的吸光度,求得叶绿素及类胡萝卜素的含量。二、 实验器具和步骤  实验器具:分光光度计(UV-1800PC,上海美普达仪器有限公司)、电子天平(ES-J220,天津市德安特传感技术有限公司)、研钵、 试管、小漏斗、滤纸、吸水纸、 移液管、量筒、剪刀  ;试剂: 95%乙醇(或80%丙酮)、石英砂、碳酸钙粉; 步骤:1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右,放入研钵中,加少量石英砂和碳酸钙粉及3~5ml 95%乙醇,研成均浆,继续研磨至组织变白,静置3~5min 。2. 取滤纸1张,置漏斗中,用乙醇湿润,沿玻棒把提取液倒入漏斗中,过滤到10ml试管中,用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次,最后连同残渣一起倒入漏斗中。 3.用滴管吸取乙醇,将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ,摇匀。4.把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95%乙醇为空白,在波长665nm、649nm、470nm下测定吸光度 计算公式:  Ca=13.95A665-6.88A649; Cb=24.96A649-7.32A665   Cx=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245更多相关讯息so栢晖生物
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发布时间: 2022 - 04 - 22
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今天,栢晖从有机碳/无机碳、有机碳的来源、有机碳的分类几方面和大家聊聊“碳”。首先,碳分为有机碳和无机碳。有机碳诸如总有机碳、可溶性有机碳、易氧化有机碳;无机碳则有碳酸根、碳酸氢根、碳酸盐。从有机碳的来源来看,可以分为植物有机碳和微生物。植物有机碳可分为脂类、角质+软木脂、木质素;微生物则分为活体微生物和微生物残体,具体如下:按组分分类可以从粒级、活性、密度三个角度来看。按粒级分类可分为颗粒有机碳和矿物结合态有机碳,按活性分类可分为活性有机碳、中间碳、惰性有机碳,从密度来看可分为轻组有机碳和重组有机碳,详情如下:以上指标均可测定,欢迎广大科研学者分享交流更多指标分类方式及测定方法。
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