一、试剂
所有试剂除注明者外,均为分析纯。
1.1 磺基水杨酸:0.6克磺基水杨酸,定容至200ml
1.2 酸性茚三酮(现配):3.75克茚三酮+90ml冰醋酸+36ml蒸馏水
1.3 甲苯
1.4 脯氨酸标准贮备液:在分析天平上精确称取25mg脯氨酸,倒入小烧杯中内,用少量蒸馏水溶解,然后倒入250ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,此标准液中每ml含脯氨酸100ug。
二、主要仪器
万分之一分析天平、水浴锅、分光光度计
三、试样的制备
取新鲜样本剪碎充分混匀后,装入样本瓶放入4℃冷藏备用。
四、分析步骤
4.1 试样溶液准备
称取鲜样0.3g,加入5ml磺基水杨酸,加盖,沸水浴10分钟,过滤,吸取滤液2ml,加2ml冰醋酸和3ml酸性茚三酮,沸水浴40分钟,冷却,加入5ml甲苯,充分振荡,静止分层,取上层甲苯溶液于比色皿中,520nm下比色。
4.2 空白溶液制备
除不加试样外,应用的试剂和操作步骤同4.1
4.3 标准曲线绘制
吸取脯氨酸标准溶液,0、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml和3ml用蒸馏水定容至50ml容量瓶中,摇匀,各瓶中脯氨酸的浓度分别为0、1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml、4ug/ml、5ug/ml及6ug/ml的系列标准浓度溶液,取7只试管分别取系列标准浓度的脯氨酸2ml,除不加试样外,其余操作步骤同4.1
五、结果计算
脯氨酸含量(%)=【C×V/(W×Vt×106)】×100
式中:
C--为从校准曲线或回归方程求得的2ml测定液中脯氨酸含量,ug/2ml
V--为提取液体积,ml;
W--为称取试样鲜重的质量,g;
Vt--为测量液体积,ml;
106、100--为换算因数。