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如何通过比色法测定植物有效磷?

日期: 2021-11-16
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今天,栢晖生物给大家整理了如何通过比色法测定植物中有效磷的含量,具体流程如下:

如何通过比色法测定植物有效磷?


一、试剂

所有试剂除注明者外,均为分析纯。

1.1 10%(w/v)的HClO4:取7.874ml 72% 的HClO4定容至100ml。

1.2 5%(w/v)的HClO4:取 39.3676ml 72%的HClO4定容至1L。

1.3 硫酸-钼酸铵溶液(溶液A)

1)溶解1.0g钼酸铵(NH4)6MO7O24·4H2O于约100ml水中; 

2)然后徐徐加入6.25ml浓H2SO4(98%); 

3)充分混匀,冷却后定容至250ml。  

1.4 10%(w/v)抗坏血酸(VC)溶液(溶液B):溶解10g抗坏血酸于水中,溶解后定容至100ml,储存于棕色瓶中,4℃保存。  

1.5 工作液:按体积比6:1混合溶液A和溶液B

注:工作液需要每天配置,现配现用,配好后放置2小时后再使用。

1.6 磷标准溶液的配制(60ppm ):准确称取0.230g磷酸二氢铵(NH4H2PO4)于水中,并定容至100ml,即得600ppm的磷标液。将600ppm的磷标液用提取剂【1:9(10% HClO4:5% HClO4)】稀释10倍,得60ppm的磷标准溶液。

二、主要仪器

万分之一分析天平、紫外可见分光光度计、恒温振荡机或往返式振荡机、酸度计 

三、试样的制备

取新鲜样本剪碎充分混匀后,装入样本瓶放在4℃备用。

四、分析步骤

4.1 称取0.5g鲜样称重m,用液氮研磨成粉末。待研钵温度上升后,加入1ml 10%HClO4研磨混匀。 

4.2 在研钵中分两次加入4.5mL的5%高氯酸,共计9ml。第一次加入4.5mL 5%高氯酸到研钵中后,将匀浆液转移到新的10ml离心管中;第二次再加入4.5mL 5%高氯酸到研钵中后,尽量洗净研钵中的样品,再将液体继续转移到第一次的10ml离心管中。

4.3 在冰上放置30min,每隔5min上下颠倒混匀几次。则样品制备溶液为10ml(V=1ml+9ml=10ml=0.01L)  于4℃,10000g离心10min,取5ml上清液至新的离心管中,用于有效磷的测定(钼蓝法)。 4.4 取1ml(V1)上清液,在上清液中加入2ml的工作液,则反应液为3ml(V2=上清液+工作液),反应液于40℃温育20min。 

4.5 反应液在室温冷却后,观察蓝色深浅,对蓝色过深的样品可适当稀释,地上部一般要稀释5倍。每个样品吸取200ul到酶标板中,于820nm可见光波下用酶标仪测定吸收值。

4.6 标准曲线的绘制:将60ppm的磷标液用提取剂稀释,形成稀释标液。再与工作液反应,生成如下系列标准反应液溶液。用提取剂与工作液的反应液做空白。

提取剂-V提  1ml 990ul 950ul 920ul 900ul 850ul 820ul 800ul

标液-V标  0  10ul  50ul 80ul 100ul 150ul 180ul 200ul 

工作液-V工  2ml  2ml  2ml  2ml  2ml  2ml  2ml  2ml 

浓度-y ppm 0 0.2 1.0 1.8 2.0 3.0 3.6 4.0

于40℃温20min后于820nm可见光波下用酶标仪测定吸收值,绘制标准曲线

五、结果计算

植物有效磷含量(mg/g)=C×(V2/V1)×V/M×N

式中:

C--为从校准曲线或回归方程求得的测定液有效磷的质量浓度,mg/L;

V--为提取液体积,ml;

M--为称取试样质量,g;

V1--为上清液体积,ml;

V2--为反应液总体积,ml;

N--为稀释倍数。


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