果糖是一种单糖,是葡萄糖的同分异构体,分子式为C6H12O6。它有一下一些特征:以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中,还能与葡萄糖结合生成蔗糖;纯净的果糖为无色晶体,熔点为103~105℃,它不易结晶,通常为黏稠性液体,易溶于水、乙醇和乙醚。以下给大家分享下如何通过间苯二酚比色法检测植物中的果糖。
一、实验试剂
所有试剂除注明者外,均为分析纯。
1.1 0.1%间苯二酚: 称取0.1g间苯二酚溶液于100mL 95%乙醇溶液(棕色瓶内保存);
1.2 标准果糖溶液:称取50mg烘至衡重的果糖,用80%乙醇配成1000ml溶液,得到质量浓度为50ug/ml的果糖溶液;
1.3 80%乙醇;
1.4 浓盐酸。
二、实验仪器
分光光度计、恒温水浴锅、电子天平、烘箱、刻度离心管、带塞试管、漏斗等。
三、试样的制备
取风干的实验室待测样品充分混匀后,按四分法缩减至 100g,粉碎,籽粒全部通过100目筛,装入样品瓶备用。
四、分析步骤
4.1 样品提取
称取50mg样品倒入10ml刻度离心管内加入4ml 80%乙醇,至于80℃水浴中不断搅拌40min ,离心,收集上清液,其残渣加2ml 80%乙醇重复提2次,合并上清液。80%乙醇定容至10ml,过滤后取滤液测定。
4.2 制作标准曲线
按照下表准备6支试管,进行编号加试剂:
编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
果糖标准液/ml | 0 | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
80%乙醇/ml | 1 | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 |
HCl/ml | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
间苯二酚/ml | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 | 2 |
80℃水浴反应10min,冷却至室温,在480nm处测定OD值,以0浓度管调零。绘制成果糖质量浓度-OD 值曲线。
4.3 显色测定
取植物提取液代替标准果糖溶液,按上述步骤进行果糖含量的测定,读取 OD值,从标准曲线得到提取液总的果糖含量,然后再行计算样品中的果糖含量。
五、结果计算
果糖含量(%)=【(a×V总×n)/(V测×m×106)】×100%
式中:
a——由标曲计算所得还原糖含量,ug;
V总——样品提取液总体积,ml;
n——为样品提取液稀释倍数
V测——显色测定时吸取样品液体积,ml;
m——样品干重,g;
106——ug换算成g 。