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植物果糖检测——间苯二酚比色法

日期: 2021-09-14
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  果糖是一种单糖,是葡萄糖的同分异构体,分子式为C6H12O6。它有一下一些特征:以游离状态大量存在于水果的浆汁和蜂蜜中,还能与葡萄糖结合生成蔗糖;纯净的果糖为无色晶体,熔点为103~105℃,它不易结晶,通常为黏稠性液体,易溶于水、乙醇和乙醚。以下给大家分享下如何通过间苯二酚比色法检测植物中的果糖。

植物果糖检测——间苯二酚比色法

一、实验试剂

所有试剂除注明者外,均为分析纯。

1.1  0.1%间苯二酚: 称取0.1g间苯二酚溶液于100mL 95%乙醇溶液棕色瓶内保存)

1.2 标准果糖溶液:称50mg烘至衡重的果糖,用80%乙醇配成1000ml溶液,得到质量浓度为50ug/ml的果糖溶液

1.3 80%乙醇;

1.4 浓盐酸。


二、实验仪器

分光光度计恒温水浴锅电子天平烘箱刻度离心管带塞试管漏斗等。


三、试样的制备

取风干的实验室待测样品充分混匀后,按四分法缩减至 100g,粉碎,籽粒全部通过100目筛,装入样品瓶备用。


四、分析步骤

4.1 样品提取

50mg样品倒入10ml刻度离心管内加入4ml 80%乙醇,至于80℃水浴中不断搅拌40min ,离心,收集上清液,其残渣加2ml 80%乙醇重复提2次,合并上清液。80%乙醇定容至10ml,过滤后滤液测定。

4.2 制作标准曲线

按照下表准备6支试管,进行编号加试剂:

编号

1

2

3

4

5

6

果糖标准液/ml

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

80%乙醇/ml

1

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

HCl/ml

1

1

1

1

1

1

间苯二酚/ml

2

2

2

2

2

2

80℃水浴反应10min,冷却至室温,在480nm处测定OD值,以0浓度管调零。绘制成果糖质量浓度-OD 值曲线。

4.3 显色测定

取植物提取液代替标准果糖溶液,按上述步骤进行果糖含量的测定,读取 OD值,从标准曲线得到提取液总的果糖含量,然后再行计算样品中的果糖含量。

五、结果计算

果糖含量(%=【(a×V×n)/(V×m×106)】×100%

式中:

a——由标曲计算所得还原糖含量,ug;

V——样品提取液总体积,ml;

n——为样品提取液稀释倍数

V——显色测定时吸取样品液体积,ml;

m——样品干重,g;

106——ug换算成g 。


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