氮是植物需要较多的必须元素之一,在土壤中呈交换性按状态存在的铵态氮,可以被植物直接吸收利用,是速效性氮素。目前,测定铵态氮的方法主要有靛酚蓝分光光度法、纳氏试剂比色法、滴定法、荧光法、电极法等。
实验步骤:
称取适量土样,准确到0.01g,置于150mL三角瓶中,按一定固液比加入氯化钾溶液,塞紧塞子,在振荡机上振荡1h。取出静置,待土壤—氯化钾悬浊液澄清后,吸取一定量上层清液进行分析。
吸取土壤浸出液2mL~10mL(含NH4+—N 2-25ug)放入50mL容量瓶中,用氯化钾溶液补充至10mL,然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL,摇匀。在20℃左右的室温下放置1h后(注1),加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物,然后用水定容至刻度。2h后,用1cm比色皿在625nm波长处(或红色滤光片)进行比色,读取吸光度。
分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL NH4+—N标准液于50mL容量瓶中,各加10mL氯化钠溶液,同(2)步骤进行比色测定。
靛酚蓝分光光度法
2mol•L-1KCl溶液浸提土壤,把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,溶液的颜色很稳定。在含氮0.05~0.5mol•L-1的范围内,吸光度与铵态氮含量成正比,可用比色法测定。
纳氏试剂比色法
用氧化镁的弱碱性蒸馏出土壤样品中铵态氮被盐酸溶液吸收,在碱性条件下与纳氏试剂络合生成黄色络合物,进行比色测定。
讨论:对不同样品土壤中按态氮测量结果显示:氧化镁蒸馏法与扩散吸收法具有相同的准确度,但扩散吸收法检测时间较长,测定过程氧化镁易沿水膜上爬沾污内室,不好操作。蒸馏法很好的避免了扩散法的问题,操作简单,检测效率高,为土壤按态氮测定提供了一种蒸馏快速、结果准确可靠的检测方法。
滴定法
通过(氯化钠或氯化钾)浸提剂提取,经蒸馏滴定检测土壤中的铵态氮。大致步骤如下:称取新鲜土样10g于三角瓶中,分别加入一定浓度的氯化钠或氯化钾浸提剂50mL,在温度为25℃的水浴振荡器中震荡30min,使用滤纸干过滤后,吸取一定体积的浸出液于消煮管中,加入120g/L的氧化镁悬浊液10mL,经凯式定氮装置蒸馏,5mL浓度为20g/L的硼酸吸收后,用0.005moI/L的硫酸溶液反滴定馏出液。
讨论:目前,我国土壤中铵态氮的检测没有统一的国家标准或行业标准,浸提方法多种多样,各种浸提方法之间存在着一定的误差,数据间无可比性,可以根据根据土壤特性方法验证适合的提取方式、时间、温度、提取剂浓度等条件。