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水果、蔬菜及其制品中叶绿素含量的测定——分光光度法

日期: 2021-08-20
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1、范围:

本标准规定了分光光度法测定水果、蔬菜及其制品中叶绿素含量的方法。

本标准适用于水果、蔬菜及其制品中叶绿素a含量、叶绿素b含量和叶绿素总含量的测定。

本标准方法中叶绿素a的线性范围为0.004 mg/g ~0.018 mg/ g,叶绿素b的线性范围为0.005mg/g~0.020mg/g。


2、原理:

试样中的叶绿素用无水乙醇和丙酮1:1(V :V)混合液提取,试液分别测定645nm和663 nm处吸光度值,利用Arnon公式计算试样叶绿素含量。


3、试剂

除非另有说明,所用水为(GB/T 6682  分析实验室用水规格和试验方法)中规定的三级水及以上,试剂均为分析纯试剂。

3.1无水乙醇。

3.2 丙酮。

3.3提取剂:无水乙醇和丙酮1:1(V:V)混合液。


4、仪器

4.1 分光光度计。

4.2分析天平(±0.01g)。

4.3高速组织捣碎机:0 r/ min~2 000r/ min。


5、分析步骤

5.1

试样制备


5.1.1含水量较多的样品

取代表性样品,切碎,混匀,用组织捣碎机制成匀浆,备用。

5.1.2 含水量较少的制品

取代表性样品,按1:1(m : m)的比例加入蒸馏水,用组织捣碎机制成匀浆,备用。

5.2 

试液制备

深绿色样品、准确称取0.5g试样于三角瓶中,加人100 mL提取剂。绿色样品,准确称取0.5g试样于三角瓶中,加入10mL提取剂。浅绿色样品,称取2.0g~5.0g试样于三角瓶中,加入10mL提取剂。三角瓶用封口膜密封,室温下避光静置提取5 h,过滤,滤液待测。

注意:光照和高温会使叶绿素发生氧化和分解,试液制备时应避免高温和光照。

5.3

试液的测定

以提取剂为空白溶液,凋零点。分别在645nm和663nm处测定试液的吸光度值。



6、结果计算

试样中叶绿素a含量、叶绿素b含量和叶绿素总含量均以质量分数w表示,单位为毫克每克(mg/g),分别按式(1)、式(2)和式(3)计算。

W1=(12.72×A1-2.59×A2)×v/(1000×m).........(1)

式中:

W1------叶绿素a含量,单位为毫克每克(mg/g);

A1------试液在663nm处的吸光值;

A2------试液在645nm处的吸光值;

v------试液体积,单位为毫升(mL);

m------试液质量,单位为克(g)。

计算结果保留3位有效数字。

W2=(22.88×A2-4.67×A1)×v/(1000×m)..........(2)

式中:

W2------叶绿素b含量,单位为毫克每克(mg/g)

计算结果保留3位有效数字。

W3=(8.05×A1+20.29×A2)×v/(1000×m)........(3) 

W3------叶绿素总含量,单位为毫克每克(mg/g)

计算结果保留3位有效数字。


7、精密度

在重复性条件下获得的2次独立测定结果的绝对差值不大于这2个测定值算术平均值的10%。

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    2024 - 09 - 20
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    2024 - 09 - 12
    1、试剂柠檬酸(AR) 柠檬酸三钠(AR) 无水甲醇(AR) 三氯甲烷(AR) 丙酮(AR) 甲苯(AR) 氢氧化钾(AR) 冰乙酸(AR) 正己烷(色谱纯) 十九烷酸甲酯(19:0)2、仪器气相色谱仪 冻干机 振荡仪 过柱装置 水浴锅 水浴氮吹仪 干式氮吹仪 高速离心机3、材料高速离心管 试管(100 mL、5 mL) 10 mL具塞试管 3 mL硅胶柱 玻璃滴管(可拆卸橡胶头)黑色塑料袋 玻璃量筒(1 mL、5 mL) 移液器(5 mL、1 mL、100 μL)4、试剂制备柠檬酸缓冲液:称取柠檬酸37.5 g,柠檬酸三钠44.1 g,溶于1 L超纯水中。提取液:依次加入柠檬酸缓冲液64 mL、无水甲醇160 mL、三氯甲烷80 mL,混合均匀。(现用现配,低温隔夜会析出盐)。甲醇甲苯混合溶液(1:1):15 mL无水甲醇、15 mL甲苯混合均匀(现用现配)。0.5 mol/L KOH溶液:称取28.05 g KOH,溶于1 L超纯水中。0.2 mol/L KOH甲醇溶液(2:3):取0.5 mol/L KOH溶液40 mL,溶入60 mL无水甲醇。1 mol/L冰乙酸溶液:取1.74 mL冰乙酸,溶入30 mL去离子水。5、样品处理土样冻干:称取土壤4.00 g(沙土8.00g)于高速离心管中,冰冻过夜,随后放入冻干机冻干。土壤含水率测定:称取土壤5.00 g于105 ℃下烘干3 h,随后冷却至室温,取出称重,计算含水率。6、测定6.1取出冻干土样,加入23ml提取液,避光振荡2h;6.2离心取上清液,重复步骤1 ,合并两个上清液;6.3依次加入三氯甲烷、柠檬酸缓冲液,避光过夜;6.4去除上清液,吹干三氯甲烷;6.5过柱;6.6吹干无水甲醇,用甲醇甲苯溶液、KOH甲醇溶液复溶,水浴,冷却至室温;6.7加入去离子水、冰乙酸...
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案例名称: 孵化中心
说明: 栢晖生物科技有限公司项目孵化中心成立于2015.06.01日,研发领域涉及生物试剂耗材、仪器、新产品开发及各生物科技服务类项目等。自成立以来,陆续吸引了大批专家教授加盟合作,并与全国数十家高校及知名企业建立了良好的合作关系。中心共有博士及以上学位骨干人员10人,专门负责公司新产品研发等工作,已成功研发出无线温度监控器及NO检测试剂盒等产品(详情见成功案例),另有细胞分选仪等三个项目正在积极孵化当中。
2017 - 05 - 31
案例名称: 孵化中心流程
说明:
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