新闻动态 News

News 技术交流

您现在的位置：首页 → 新闻动态 → 技术交流

土壤氨基糖实验方法介绍

日期： 2024-07-15

标签:

土壤氨基糖实验流程如下：

一、实验方法及原理

氨基糖在吡啶-甲醇溶液中,以 4-二甲氨基吡啶为催化剂的条件下与盐酸羟胺和乙酸酐发生糖腈乙酰酯反应, 所得衍生物可利用气相色谱测定。

二、实验步骤

2.1主要实验仪器

GC（毛细管分流进样口， FID检测器）

鼓风烘箱（涵盖105℃，可定时8h）

涡旋混合仪（2850rpm）

离心机（50mL，3650rpm）

冷冻干燥机

水浴锅（45℃、80℃）

旋转蒸发仪（100mL，65℃）

离心机（5mL，8000rpm）

2.2 实验步骤

1、水解：称取约0.5~1.0g的土样于水解管中，沿管壁加入5 mL 6 mol/L盐酸，用氮气置换水解管中空气2min后密封。在烘箱中105℃放置8h水解。

2、净化：

a) 除酸：待水解液冷却至室温后，加入200μgN-甲基氨基葡萄糖（1mg/mL水溶液，200μL）。涡旋仪震荡30s混匀。取部分水解液于5mL离心管中，于8000rpm离心1min。取上清液2.5mL于50mL离心管中用氮气于65℃吹干。用25mL纯水溶解吹干后的残渣。加0.4mol/LKOH和0.01mol/LHCL调节pH至6.6~6.8。

b) 除盐：离心管以3000rpm离心5min，转移出上清液于100mL茄型瓶中，于65℃，25rpm旋转蒸发至干。再加入10mL无水甲醇分两次溶解瓶中残渣。后转移至另一50mL离心管。氮吹至5mL以下，涡旋溶解管壁有机物后，以4000rpm离心5min，除盐。再将上清液转移到5mL衍生瓶中并加入100μg戊五醇（1mg/mL水溶液，100μL），于40℃氮气吹干。

3、标准样品制备：

同时准备3个标准样品。另取衍生瓶中加入100μL混标（1mg/mL的氨基葡萄糖、氨基半乳糖、氨基甘露糖，0.5mg/mL胞壁酸），100μgN-甲基氨基葡萄糖（1mg/mL水溶液，100μL），100μg戊五醇（1mg/mL水溶液，100μL），轻轻摇匀后，与样品衍生瓶一起吹干。

4、衍生：

a) 向吹干的样品和标准样品的衍生瓶中加入300μL衍生试剂（称取盐酸羟胺320mg，4-二甲基氨基吡啶400mg，用吡啶：甲醇=4:1（v:v）溶液溶解稀释至10ml）后盖紧。涡旋30s混匀。

b) 在80℃水浴35min，每5min震荡一次。冷却至室温后加入1mL醋酐，涡旋30s混匀后，在80℃水浴25min，每5min震荡一次。衍生管冷却至室温后加入1.5mL二氯甲烷，涡旋30s混匀。

5、衍生物净化：

a) 往衍生管中加入1mL1mol/LHCL（取6 mol/L盐酸约17mL，加水定容至100mL，摇匀）加盖密封后涡旋30s。静置分层后吸出上层无机相。

b) 改加1mL纯水，重复上述步骤3次。最后一次尽量吸出无机相。

c) 剩余有机相于44℃下氮吹干。然后溶解到300μL稀释剂（乙酸乙酯：正己烷=1:1（V:V）），然后转移到带内插管进样瓶中待测。

2.3色谱条件

土壤氨基糖实验方法介绍

2.4测定方法

依据保留时间一致性进行定性识别，单浓度内标法定量。根据标准样品的保留进间确定样品中目标物的色谱峰。以标准样品中N-甲基氨基葡萄糖与目标物的峰面积、实际量比值得出目标物质与内标物之间的校正参数。再根据样品中内标物峰面积与目标物峰面积计算得出样品中目标物的量，从而计算样品中目标物的含量。

因为对照品跟样品中加入了等量的戊五醇，因此根据对标准样品和样品中戊五醇的峰面积响应值之比计算样品中戊五醇的回收率来判断样品前处理过程的损失是否合理。

2.5计算方法

内标校正参数计算：

式中：

f——校正参数

A标——标准样品中目标标准物质峰面积；

m标——标准样品中目标标准物质的量，μg；

A_{N-甲基氨基葡萄糖}——标准样品中N-甲基氨基葡萄糖标准物质峰面积；

m_{N-甲基氨基葡萄糖}——标准样品中N-甲基氨基葡萄糖标准物质的量，μg。

样品含量计算：

式中：

w——样品中目标物质的含量，μg/g

f——校正参数

A样——样品中目标标准物质峰面积

m样——样品称样量，g

A_{N-甲基氨基葡萄糖}——标准样品中N-甲基氨基葡萄糖标准物质峰面积

m_{N-甲基氨基葡萄糖}——标准样品中N-甲基氨基葡萄糖标准物质的量，μg

以戊五醇为目标物计算回收率：

式中：

R——戊五醇回收率，%；

A样——样品中戊五醇峰面积

A|样——标准样品中戊五醇峰面积的平均值

更多检测相关讯息so栢晖生物了解

上一篇：植物残体碳览析|木质素酚、角质与软木脂、脂类（附标准图谱参考）下一篇：客户文章（IF：18.9）|盐碱地复垦通过优先积累植物源碳来提高表层土壤碳储量

最新资讯 MORE+
十年的矿质施肥改变颗粒态和矿物结合态组分有机质的分子组成来源

点击次数: 0

2025 - 01 - 09

文献解读原名：Decadal application of mineral fertilizers alters the molecular composition and origins of organic matter in particulate and mineral-associated fractions译名：十年的矿质施肥改变颗粒态和矿物结合态组分有机质的分子组成和来源期刊：SBBIF：9.8发表时间：2023.07第一作者：Zhichao Zou摘要背景：长期矿质施肥对土壤有机质（SOM）的数量、质量和稳定性的影响仍不明确。方法：通过结合四种生物标志物（自由与结合态脂类、木质素酚和氨基糖），研究中国北方农田在10年矿质施肥下（400 kg N ha−1 yr−1, 120 kg P ha−1 yr−1 和 50 kg K ha−1 yr−1）的SOM的分子组成、分解和来源。我们关注于两个差异化的SOM组分：颗粒态有机质（POM）和矿质结合态有机质（MAOM）。结果：尽管施肥对全土SOC的影响有限，但导致MAOM中SOC增加23%，并且改变了其组成和来源。施肥使POM中植物源的萜类化合物增加46%，MAOM中长链脂类（≥20）增加116%，但是降低了POM中54%的短链脂类（结论：矿质施肥通过改变温带农业生态系统中矿物-有机复合体的分子组成和固存，增加SOM的稳定性和持久性。研究背景SOM能够维持土壤肥力、促进土壤水分存留和有机碳（SOC）固存，对农业生态系统的功能的发挥至关重要。在典型的农田，大量矿质肥料的输入增加了作物生产力，导致大量的碳（C）通过残体、根系及其分泌物进入土壤，随后改变了SOM周转。然而，我们对SOC稳定和固存对营养施肥的响应方向和程度的基础理解仍然不明确。之前的研究报道了农业生态系统中施肥管理导致更高、中性以及甚至更低的SOC水平。在集...
随温度变化的土壤储存：半干旱草原微生物活力和呼吸作用的变化

点击次数: 0

2025 - 01 - 02

文献解读原名：Temperature-dependent soil storage: Changes in microbial viability and respiration in semiarid grasslands译名：随温度变化的土壤储存：半干旱草原微生物活力和呼吸作用的变化期刊：Soil Biology and BiochemistryIF：9.8线上发表日期：2024年12月发表日期：2025年3月通讯作者：田建卿（中国科学院植物研究所）亮点（1）相比于-20℃，在4℃下储存土壤细胞的存活率更高。（2）在 4 °C 下温和解冻 3 天可优化冻土中的细胞活力。（3）土壤呼吸对储存的响应取决于土壤类型。背景土壤微生物是生物地球化学循环的关键引擎，也是土壤有机碳（SOC）分解和稳定的关键驱动因素。理想情况下，研究人员应在取样后立即对新鲜土壤进行大多数微生物活动和微生物介导的土壤生物地球化学分析，然而，由于实际限制，在低温下储存土壤是土壤微生物学研究中的常见做法，可能会影响微生物活力和微生物介导的呼吸作用，几十年来，不适当的储存条件导致了已发表的研究中相互矛盾的结论。目前对储存过程中活微生物参数的变化和微生物介导的呼吸仍然缺乏了解。材料与方法（1）于2022年8月和2023年5月在从内蒙古草原生态系统研究站（IMGERS；116◦42′E，北纬43°38′，海拔约1260米)。中国内蒙古自治区采集了4种类型的土壤，包括大针茅（S.grandis）、羊草（L.chinensis）、西林河流域草甸（湿地）和浑善达克沙地（沙质）土壤。之后将4种类型的土壤样本分别在4℃和 -20℃下储存 0、5、40 和210天。对于在-20℃下保存的土壤，作者采用了两种解冻方法：室温下直接解冻和4 ℃下温和解冻（gentle thaw...
直播主题| 土壤非共生固氮的能量限制特征与机制

点击次数: 0

2024 - 12 - 06

# 栢晖 #—特色检测指标—土壤、植物酶活检测氨基糖、PLFA及其同位素、磷组分木质素酚、CUE、有机氮组分、有机酸氨基酸、微生物量碳氮磷、同位素等苯多羧酸、红外光谱、微生物多样性等其他土壤、植物、水体等常规检测指标均可测定欢迎联系下方相关工作人员详细沟通
文献解读（2024.11发表）| 根际是微生物残体进入土壤碳库的热点区

点击次数: 0

2024 - 11 - 29

文献解读原名：Rhizosphere as a hotspot for microbial necromass depositioninto the soil carbon pool译名：根际是微生物残体进入土壤碳库的热点区期刊：Journal of EcologyIF: 5.3发表日期：2024.11.15第一作者：汪其同背景森林土壤是陆地生态系统最大的有机碳（SOC）库，高效发挥森林土壤碳汇功能是实现“双碳”战略目标的重要途径之一。相应地，科学认识森林土壤固碳过程与调控机制已成为当前森林生态学、土壤学领域重要的前沿基础科学问题与林业碳汇功能适应性管理的核心现实需求。近年来不断涌现的证据表明，微生物通过合成代谢而迭代积累的微生物残体很大程度上主导了SOC的长期积累和固持。其中，由于根源C持续输入在根系周围的根际微域形成了一个独特而又典型的微生物热点区，并伴随着更快的微生物生长和更强的微生物代谢活性，进而导致根际区微生物残体对长期SOC积累贡献能力比非根际区更为突出和明显。然而，目前大多研究通常将根际和非根际土壤视为一个均质有机体，而缺乏针对根际区SOC形成过程与稳定性机制的专一性试验研究，导致根际区土壤碳动态过程及其生态重要性在很大程度上未被探索和了解，已成为森林土壤碳汇功能变化认知最少且极为薄弱的关键环节之一。基于此，中国科学院成都生物研究所尹华军研究团队通过系统收集青藏高原典型高寒针叶林39个样点的根际和非根际土壤样品（图1），量化了根际和非根际土壤中有机碳和氨基糖的浓度，并通过计算根际相对于非根际土壤中增加的氨基糖与增加的有机碳的比例（RAS/SOC），评估了微生物残体对根际SOC积累的贡献程度。同时测定了根际土壤养分浓度和微生物生理性状，以揭示多变环境下根际微生物残体对SOC积累贡献的潜在微生物调控机制。图1 39个高寒针叶林采样点分布图我们假设：（1...

文体活动 MORE+

案例名称：孵化中心

说明：栢晖生物科技有限公司项目孵化中心成立于2015.06.01日，研发领域涉及生物试剂耗材、仪器、新产品开发及各生物科技服务类项目等。自成立以来，陆续吸引了大批专家教授加盟合作，并与全国数十家高校及知名企业建立了良好的合作关系。中心共有博士及以上学位骨干人员10人，专门负责公司新产品研发等工作，已成功研发出无线温度监控器及NO检测试剂盒等产品（详情见成功案例），另有细胞分选仪等三个项目正在积极孵化当中。

2017 - 05 - 31

案例名称：孵化中心流程

说明：

2017 - 07 - 17