实验方法| 土壤铁氧化物结合态有机碳的提取和测定

日期： 2023-09-28

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土壤中的活性铁氧化物采用 DCB 还原溶解提取，提取过程中释放的有机碳为铁氧化物结合态有机碳。具体方法如下:

称取过0.25mm筛的土样0.5000g于50mL带盖离心管中，先加入30mL提取剂(0.27mol/L柠檬酸三钠和0.11mol/L碳酸氢钠混合溶液，pH=7.3)，80℃水浴预热15分钟，准确加入0.5g连二亚硫酸钠粉末，保温15分钟(期间不断振荡)，然后4000g离心力下离心20 分钟。将上清液倒于100mL容量瓶中，向固体残渣中加入5mL 超纯水，摇匀，离心，上清液倒入对应的容量瓶，清洗步骤重复五次，将最后的残渣冷冻干燥、研磨。

在上述的提取实验中需进行对照实验以校正水浴加热过程中水溶性有机碳的释放。在对照实验中，向土壤样品中加入 30mL 提取液(1.6mol/L氯化钠和0.11mol/L碳酸氢钠混合液，pH=7.3)，80℃ 水浴预热 15 分钟，加入0.44g氯化钠固体，继续加热并振荡15分钟，4000g离心20分钟，残渣用5mL超纯水清洗五次后，冷冻干燥后研磨。

最后，将上述经DCB 处理和NaCl处理后的残渣按元素分析仪方法测定其中的有机碳、全氮比值。

铁氧化物结合态有机碳=NaCl处理残渣碳含量-DCB处理残渣碳含量

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一、试剂药品浓盐酸，氢氧化钠，氯化钡，酚酞二、试剂配制2.1.0.05mol/l盐酸：取4.16ml浓盐酸缓缓加入1000mlUP 水中。2.2.0.1mol/l氢氧化钠：0.4g氢氧化钠用UP水定容至100ml。2.3.酚酞指示剂：称取0.5g酚酞，用95%乙醇溶解定容至100ml。2.4.11mol/l氯化钡溶液：20.82g氯化钡用UP水定容至100ml。三、洗涤方法所有新的玻璃器皿：用洗涤剂清洗干净后，再用自来水洗，再超声，再用UP水冲洗，再放入90度烘箱烘干。四、实验方法4.1 土壤预培养：称取适量土壤样品置于常温下预培养数天，使土壤恢复到常温状态。4.2 密闭培养：将恢复到常温状态的样本，称取10g置于250ml广口具塞瓶中，内置盛有10ml0.1mol/l氢氧化钠溶液的小玻璃瓶，用蒸馏水调节土壤湿度至其最大持水量的60%，5℃恒温培养7天。4.3 测定：培养结束后取出里面盛氢氧化钠的小玻璃瓶，先加入2ml氯化钡溶液，再加入2滴酚酞指示剂，再用0.05mol/l的盐酸滴定至红色消失，记录滴定体积，计算出CO2的释放量，同时做空白对照(空白用水代替）。更多检测相关讯息so栢晖生物了解~
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1、试剂柠檬酸（AR）柠檬酸三钠（AR）无水甲醇（AR）三氯甲烷（AR）丙酮（AR）甲苯（AR）氢氧化钾（AR）冰乙酸（AR）正己烷（色谱纯）十九烷酸甲酯（19：0）2、仪器气相色谱仪冻干机振荡仪过柱装置水浴锅水浴氮吹仪干式氮吹仪高速离心机3、材料高速离心管试管（100 mL、5 mL） 10 mL具塞试管 3 mL硅胶柱玻璃滴管（可拆卸橡胶头）黑色塑料袋玻璃量筒（1 mL、5 mL）移液器（5 mL、1 mL、100 μL）4、试剂制备柠檬酸缓冲液：称取柠檬酸37.5 g，柠檬酸三钠44.1 g，溶于1 L超纯水中。提取液：依次加入柠檬酸缓冲液64 mL、无水甲醇160 mL、三氯甲烷80 mL，混合均匀。（现用现配，低温隔夜会析出盐）。甲醇甲苯混合溶液（1：1）：15 mL无水甲醇、15 mL甲苯混合均匀（现用现配）。0.5 mol/L KOH溶液：称取28.05 g KOH，溶于1 L超纯水中。0.2 mol/L KOH甲醇溶液（2：3）：取0.5 mol/L KOH溶液40 mL，溶入60 mL无水甲醇。1 mol/L冰乙酸溶液：取1.74 mL冰乙酸，溶入30 mL去离子水。5、样品处理土样冻干：称取土壤4.00 g（沙土8.00g）于高速离心管中，冰冻过夜，随后放入冻干机冻干。土壤含水率测定：称取土壤5.00 g于105 ℃下烘干3 h，随后冷却至室温，取出称重，计算含水率。6、测定6.1取出冻干土样，加入23ml提取液，避光振荡2h；6.2离心取上清液，重复步骤1 ，合并两个上清液；6.3依次加入三氯甲烷、柠檬酸缓冲液，避光过夜；6.4去除上清液，吹干三氯甲烷；6.5过柱；6.6吹干无水甲醇，用甲醇甲苯溶液、KOH甲醇溶液复溶，水浴，冷却至室温；6.7加入去离子水、冰乙酸...
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说明：栢晖生物科技有限公司项目孵化中心成立于2015.06.01日，研发领域涉及生物试剂耗材、仪器、新产品开发及各生物科技服务类项目等。自成立以来，陆续吸引了大批专家教授加盟合作，并与全国数十家高校及知名企业建立了良好的合作关系。中心共有博士及以上学位骨干人员10人，专门负责公司新产品研发等工作，已成功研发出无线温度监控器及NO检测试剂盒等产品（详情见成功案例），另有细胞分选仪等三个项目正在积极孵化当中。

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