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单宁的检测方法

日期: 2021-09-01
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单宁含量的测定


单宁即鞣酸是多酚类物质,主要有2类,一是缩合单宁即黄烷醇衍生物,另一类是可水解单宁,通常为糖类化合物的焦性没食子酸酯。

目前,对单宁含量测定方法的研究较多,有皮粉法、高锰酸钾滴定法、EDTA滴定法、酒石酸亚铁鳌合法、香草醛法、Folin-Denis法和Folin-Ciocalteu法、铁氰化钾分光光度法、液相色谱法和原子吸收法、毛细管电泳及化学发光法、高灵敏示波电位动力学分析法、荧光动力学分析法等,但上述单宁测定的传统方法大都比较繁琐、而在众多单宁含量的测定方法中,分光光度法的应用最为广泛,但其法使用的鳌合剂众多,对单宁的提取方法和测定条件也根据不同的被测物不同而异。


测定方法



1.EDTA络合滴定法

根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质,在样品提取液中加入过量的标准Zn(Ac)2溶液,待反应完全后,再用EDTA标准溶液滴定剩余的,根据EDTA标准溶液的消耗量,可计算出样品中单宁的含量。

2.高锰酸钾法

作为多酚,单宁是一种强还原剂,极易被氧化剂氧化,还可被活性炭吸附。本测定以高锰酸钾为氧化剂,根据样品中单宁可以被活性炭吸附,测定样品液用活性碳吸附前后的氧化值之差,计算单宁物质的含量。

3.比色法

用二甲基甲酰胺溶液振荡提取植物中单宁,过滤后取滤液,在氨存在的条件下,与柠檬酸铁铵形成一种棕色络合物,用分光光度计在525nm波长处测定其吸光度值,与标准系列比较定量。

样本前处理制备:

样品弃去杂质,用机械粉碎机粉碎,并全部通过1.0mm孔径的筛子,充分混匀


步骤分析



1、试样溶液制备

称取试样约1.0g,精确至0.0001g至于100mL三角瓶中,准确加入50mL 75%二甲基甲酰胺溶液,加塞子密封,于振荡机上振荡60min,然后用双层滤纸过滤,滤液备用。

2、标准曲线绘制

用75%二甲基甲酰胺溶液配置标准溶液系列分别相当于0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5mg/mL的单宁酸。

吸取以上单宁酸标准溶液系列1.0mL,置于6只试管中,准确加入5.0mL水和1.0mL柠檬酸铁铵溶液,振荡混匀,再各加1.0mL氨溶液,充分振荡混匀,静置。自加氨水10min后,以水作空白,用分光光度计在525nm波长处测定吸光度值。

以吸光度值作为纵坐标,以单宁酸标准溶液系列中单宁酸含量(mg/mL)作横坐标,绘制标准曲线。

3、样品测定

取上述滤液1.0mL,置于试管中,加6.0mL水和1.0mL氨溶液,振荡混匀、静置。自加氨水10min后,以水作空白,用分光光度计在525nm波长处测定吸光度值。

取上述滤液1.0mL,置于试管中,加5.0mL水和1.0mL柠檬酸铁铵溶液,振荡混匀,再加1.0mL氨溶液,充分振荡混匀、静置。自加氨水10min后,以水作空白,用分光光度计在525nm波长处测定吸光度值。结果为两次测定吸光度值之差。




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